[发明专利]重组腺相关载体

说明书

提供了腺相关病毒(AAV)载体及其用途。更具体地，提供了AAV载体，该AAV载体显示出对于某些靶组织，诸如中枢神经系统(CNS)和脂肪组织的特异性向性(specific tropism)，并且可以用于转导细胞以用于将感兴趣的基因引入到靶组织中。还提供了包含AAV载体和药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体的药物组合物。

1.技术领域

本公开内容总体上涉及腺相关病毒(AAV)载体(vector)及其用途。更具体地，本公开内容涉及载体，所述载体显示出对于某些靶组织，诸如中枢神经系统(CNS)和脂肪组织的特异性向性(specific tropism)，并且可以用于转导细胞以用于将感兴趣的基因引入到靶组织中。

2.背景

腺相关病毒(AAV)是目前正被用于基因疗法应用的单链DNA病毒。AAV是细小病毒科(Parvoviridae)，依赖病毒属(Dependovirus)的成员。约4.7kb长(1，2)的AAV基因组包含侧接反向末端重复元件(ITR)的两个开放阅读框(ORF)rep和cap(3)。存在11种已知的具有不同的细胞靶和抗原性质的AAV血清型(Wu等人,2006)。最近，已经发现了这些主要AAV血清型的约100种基因组变体(6)。

第一个AAV载体是30年前基于AAV2生成的(Tratschin等人,1984；Hermonat等人,1984)。基于AAV2的载体(AAV2)已经被充分研究，并且目前在多种疾病以及HIV疫苗的临床试验中使用，所述疾病包括囊性纤维化、血友病B、前列腺癌和黑素瘤癌症(melanomacancer)、Canavan病、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、肌营养不良、类风湿性关节炎(15)。这些载体已经显示出在动物模型中将基因递送到肌肉、脑、视网膜、肝脏和肺中的宽范围的细胞(5，16-22)。与当前的AAV载体系统相关的问题包括某些组织的非预期转导，以及缺乏感兴趣的组织的有效转导。因此，安全且有效地将基因递送到感兴趣的特定组织，诸如CNS组织，仍然是该领域的重大挑战。

3.概述

提供了根据本公开内容的重组AAV载体血清型，所述重组AAV载体血清型被称为rAAVRec2和rAAVRec3。发现rAAVRec2载体和rAAVRec3载体分别具有对脂肪组织和CNS组织的增加的向性。与在野生型AAV2和AAV5中发现的那些氨基酸残基相比，本发明的AAV载体包含在衣壳VP1、VP2和VP3区域中的氨基酸残基的修饰(图1A)。另外，rAAVRec3能够繁殖到高病毒滴度水平。这样的生长性质对于有效且较低成本地产生有用的病毒储备液是有利的。

在实施方案中，提供了新的rAAV衣壳蛋白，以及编码新的衣壳的核酸分子。在具体实施方案中，新的衣壳氨基酸序列包括图1A的那些(rAAVRec2和rAAVRec3)。在本公开内容的方面中，提供了编码本文公开的病毒衣壳和衣壳蛋白的核酸分子。编码本发明衣壳蛋白的核酸分子包括图1B中的那些(rAAVRec3)。还提供了包括编码rAAVRec2和rAAVRec3衣壳蛋白的核酸分子的载体，以及包含本文公开的rAAVRec2和rAAVRec3核酸和/或载体的细胞(体内或体外)。这样的核酸、载体和细胞可以用于例如rAAVRec2和rAAVRec3衣壳蛋白的定向表达。这样的蛋白表达可以用于开发用于生产如本文所描述的新的AAV载体的试剂(例如，辅助构建体或包装细胞)。还提供了重组病毒(病毒体)，其中所述病毒的衣壳蛋白是rAAVRec2的衣壳蛋白或rAAVRec3的衣壳蛋白。这样的病毒可以用于将感兴趣的异源核酸转导到靶细胞或组织中。