[发明专利]使用核小体相互作用蛋白结构域来增强靶向基因组修饰

权利要求书

1.融合蛋白，其包含与可编程DNA修饰蛋白连接的至少一种核小体相互作用蛋白结构域。

2.权利要求1的融合蛋白，其中所述至少一种核小体相互作用蛋白结构域是来自高迁移率族(HMG) box (HMGB)蛋白的DNA结合结构域，所述蛋白选自HMGB1、HMGB2或HMGB3；选自HMGN1、HMGN2、HMGN3a、HMGN3b、HMGN4或HMGN5的HMG核小体-结合(HMGN)蛋白；来自组蛋白H1变体的中央球状结构域；来自染色质重塑复合物蛋白的DNA结合结构域，所述蛋白选自开关/蔗糖非发酵性(SWI/SNF)复合物、模仿开关(ISWI)复合物、克罗莫结构域-解旋酶-DNA结合(CHD)复合物、核小体重塑和去乙酰基酶(NuRD)复合物、INO80复合物、SWR1复合物、RSC复合物，或其组合。

3.权利要求2的融合蛋白，其中所述至少一种核小体相互作用蛋白结构域是HMGB1 boxA结构域、HMGN1蛋白、HMGN2蛋白、HMGN3a蛋白、HMGN3b蛋白、组蛋白H1中央球状结构域、ISWI蛋白DNA结合结构域、CHD1蛋白DNA结合结构域或其组合。

4.权利要求1-3中任一项的融合蛋白，其中所述可编程DNA修饰蛋白具有核酸酶活性。

5.权利要求4的融合蛋白，其中所述可编程DNA修饰蛋白是成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)核酸酶或切口酶、锌指核酸酶(ZFN)、转录激活物样效应核酸酶(TALEN)、大范围核酸酶或包含与核酸酶结构域连接的可编程DNA结合结构域的嵌合蛋白。

6.权利要求1-3中任一项的融合蛋白，其中所述可编程DNA修饰蛋白具有非-核酸酶活性。

7.权利要求6的融合蛋白，其中所述可编程DNA修饰蛋白是包含与非-核酸酶结构域连接的可编程DNA结合结构域的嵌合蛋白。

8.权利要求7的融合蛋白，其中所述可编程DNA结合结构域是经修饰以缺少所有核酸酶活性的CRISPR蛋白、锌指蛋白或转录激活物-样效应物。

9.权利要求7的融合蛋白，其中所述非-核酸酶结构域具有乙酰基转移酶活性、去乙酰基酶活性、甲基转移酶活性、去甲基酶活性、激酶活性、磷酸酶活性、泛素连接酶活性、去泛素化活性、腺苷酸化活性、去腺苷酸化活性、SUMO化活性、去SUMO化活性、核糖基化活性、去核糖基化活性、豆蔻酰化活性、去豆蔻酰化活性、瓜氨酸化活性、解旋酶活性、氨基化活性、去氨基化活性、烷基化活性、去烷基化活性、氧化活性、转录激活活性或转录阻抑活性。

10.权利要求9的融合蛋白，其中所述非-核酸酶结构域具有胞嘧啶脱氨酶活性、组蛋白乙酰基转移酶活性、转录激活活性或转录阻抑活性。

11.权利要求1-10中任一项的融合蛋白，其中所述至少一种核小体相互作用蛋白结构域通过化学键直接、通过接头间接或其组合，与可编程DNA修饰蛋白连接。

12.权利要求1-11中任一项的融合蛋白，其中所述至少一种核小体相互作用蛋白结构域与可编程DNA修饰蛋白在其N-末端、C-末端、内部位置或其组合连接。

13.权利要求1-12中任一项的融合蛋白，进一步包含至少一种核定位信号、至少一种细胞-穿透结构域、至少一种标记结构域或其组合。

14.融合蛋白，其包含与至少一种核小体相互作用蛋白结构域连接的成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)蛋白。

15.权利要求14的融合蛋白，其中所述CRISPR蛋白是II型CRISPR/Cas9核酸酶或切口酶，或者所述CRISPR蛋白是V型CRISPR/Cpf1核酸酶或切口酶。