[发明专利]具有多个测试线的色谱带、包括其的诊断试剂盒及包括多个竞争反应测定步骤的定性、半定量、定量分析方法

说明书

本发明涉及具有多个竞争分析用测试线的色谱带、具有上述色谱带的诊断试剂盒及利用其来对样本内的靶物质进行定性或定量分析的方法。本发明的色谱带不仅可以通过肉眼或传感器来对只有一个配体的结合位点或大小小的靶物质进行定性分析，而且还可以迅速、方便地执行可靠性高的定量分析。进而，具有通过测试线和对照线之间的相互弥补来改善分析物质的浓度测定范围的效果。

技术领域

本发明涉及具有多个测试线的色谱带、具有上述色谱带的诊断试剂盒及利用多个竞争反应来对样本内的靶物质进行定性和/或定量分析的方法。本发明的色谱分析用装置可利用于诊断及预测、食品的安全性测试、环境分析及化合物分析等多种领域的定性(qualitative)、半定量(semi-quantitative)、定量(quantitative)分析。

背景技术

被公认为快速检测(rapid test)方法的色谱分析法作为可以利用靶物质以及与靶物质进行特异性结合的配体的结合反应，来在短时间内对微量的靶物质(analyte)进行定性及定量分析的方法，使用于包括各种疾病的诊断或测试的医疗、农业、畜牧业、食品、军事、环境等多种领域。这种色谱分析普遍使用包括可以与所要检测的靶物质发生反应来呈现出变化的反应物质的试纸条(assay strip)或在塑料外壳安装试试试纸条的装置形态的分析装置。图1为使用于普通色谱分析的试纸条的剖视图。如图1所示，普通的试纸条包括：样本垫，用于收容液相样本；接合体垫，含有接合体(conjugate)，上述接合体(conjugate)由产生可利用肉眼或传感器来进行检测的信号的标记物质(例如，荧光物质或金粒子)与核酸、抗原、抗体等配体相接合而成；检测垫，形成有测试线和对照线，上述测试线固定样本中的靶物质和/或于上述接合体进行特异性结合的结合剂(核酸、抗体或抗原)，上述对照线能够确认样本的展开；以及吸湿垫，最终收容液相样本，而这些功能性垫按上述所罗列的顺序以一部分重叠的形态相连接，并附着于固体支撑体上，从而连续排列。在上述试纸条安装于塑料外壳的内部来使用的情况下，在外壳的上部形成有用于在样品垫的位点滴落样本的样本投入口，在固定有检测垫的结合剂的位点形成有用于确认测试结果的结果确认窗口。

像这样，在利用试纸条的色谱分析法中，若在样本垫滴落液相样本，则液相样本因毛细管现象而通过接合体垫及检测垫来移动，最终被吸湿垫收容。例如，以线型方式在检测垫固定可以与所要测定的抗原相结合的抗体(测试线，第一结合抗体)，另一个抗体(第二结合抗体)与金粒子之类的标记物质相结合，并展开样本。所展开的样本一边经由接合体垫，一边由一部分形成抗原-金粒子第二结合抗体的复合物来展开，而上述抗原-金粒子第二结合抗体被所固定的测试线的第一结合抗体捕获，从而形成“固定于测试线的第一结合抗体-金粒子第二结合抗体复合物”。由此，上述测试线因金粒子而呈现出红色。像这样，上述接合体垫所含有的接合体也与液相样本一同移动，并且，若在样本中存在所要分析的物质，则接合体经由靶物质与固定在检测垫的结合剂相结合(通常称之为“三明治(sandwich)”反应)。

但是，在使用三明治分析法进行分析的情况下，靶物质要与第一结合抗体、第二结合抗体-标记物质相结合来以能够发生三明治反应的方式产生两处以上抗体或配体的结合部位(epitope)，而在靶物质的大小小的情况下，(肽蛋白质、药物、过敏原等)因空间障碍(Steric hinderence)等而有可能发生结合力(binding affinity)变弱的问题，并且，可以发生由产生抗体的起源动物(host)等引起的特异性(specificity)、敏感度(sensitivity)及相互反应性(cross-reactivity)的问题。

因此，为了克服这种问题，还利用在检测垫的测试线固定靶物质，使得样本内的靶物质和测试线的固定的靶物质与接合体垫的抗体-标记物质的结合位点相竞争，从而随着样本内的靶物质的浓度增加，测试线的信号变弱的竞争反应(通常称之为“竞争(competition)反应”)。利用基于上述原理的试纸条，可以通过肉眼或传感器来检测样本中是否存在靶物质。