[发明专利]冠状病毒、包含其的疫苗以及预防疾病的方法

说明书

一种冠状病毒、包含其的疫苗和预防疾病的方法。这类的一个实施方式包括活的减毒冠状病毒，其包含编码多蛋白的变体复制酶基因，所述多蛋白包含非结构蛋白（nsp）‑15，所述复制酶基因编码nsp15并引起影响nsp15稳定性或活性的任何变化，包括突变和/或缺失。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年3月3日提交的美国临时申请号为62/466,779的权益，其内容通过引用结合至本申请。

关于联邦政府资助研究的声明

本发明是在美国国立卫生研究院授予的资助或合同号R01 AI085089以及美国农业部授予的农业研究服务项目5030-32000-118-11S的政府支持下完成的。政府拥有本发明的某些权利。

背景技术

本发明通常涉及冠状病毒。本发明特别涉及用于现有的和新兴的冠状病毒的疫苗及其生产方法。

冠状病毒为冠状病毒科中属于冠状病毒亚科的病毒种类，是感染人类和动物并引起呼吸道、胃肠道或神经系统疾病的正义RNA病毒。冠状病毒可以从动物宿主中出现，在人类中引起重大流行病，例如2002-2003年的严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)，其被认为是2012年的一种新兴的病毒。值得注意的是，这些病毒可以在巨噬细胞的细胞质中复制，巨噬细胞被认为是一种用于检测和消除入侵病原体的关键的先天哨兵的细胞类型。冠状病毒编码多种干扰素拮抗剂，其可能阻碍和延迟I型干扰素(IFN)和干扰素刺激基因(ISG)的激活，并且一系列拮抗剂的表达导致发病。最近一项使用SARS-CoV感染小鼠的研究记录了导致疾病的干扰素的延迟和有限产生。

用于冠状病毒疾病的现有疫苗方法基于通过表达载体的自发性天然减毒、病毒灭活和重组病毒结构蛋白。现有候选疫苗不会引发强烈的保护性免疫应答。缺乏长期保护可能是由于先天免疫反应的低效诱导，例如1型干扰素，它是促进适应性免疫和免疫记忆的关键分子。

鉴于上述情况，可以理解，存在对于治疗冠状病毒的持续期望，并且如果疫苗为可用于接种针对各种冠状病毒受试者的疫苗，包括可以刺激强烈的先天免疫应答和有效的适应性免疫保护的疫苗，将会是理想的。

发明内容

本发明提供突变体冠状病毒、包含突变体冠状病毒的疫苗、制备疫苗的方法和个体预防疾病的方法。

根据本发明的一个方面，提供了一种活的减毒冠状病毒，其包括编码多蛋白的变体复制酶基因，所述多蛋白包含非结构蛋白(nsp)-15。所述复制酶基因编码nsp15，并引起影响nsp15稳定性或活性的任何变化，包括突变和/或缺失。

本发明的其它方面包括包含上述冠状病毒的变体复制酶基因、由所述变体复制酶基因编码的蛋白质、包含此类变体复制酶基因的质粒、包含上述冠状病毒的疫苗，以及通过向个体施用所述疫苗来治疗或预防个体疾病的方法。

根据本发明的另一方面，提供了一种预防个体疾病的方法，包括在个体中激活I型干扰素，其中I型干扰素的激活降低了冠状病毒的致病性。

根据本发明的另一方面，提供了一种生产疫苗的方法，包括修饰野生型冠状病毒以产生活的减毒冠状病毒，其包含编码多蛋白的变体复制酶基因并在非结构蛋白(nsp)-15中产生影响nsp15稳定性或活性的变化，包括突变和/或缺失。包括冠状病毒和载体的疫苗可以被生产。给个体施用疫苗会引起个体中I型干扰素的激活，这降低了野生型冠状病毒的致病性。

如上所述的冠状病毒的技术效果优选包括能够使用冠状病毒接种个体，所述冠状病毒引起I型干扰素的激活，其将限制病毒的复制、传播和疾病。

从以下详细描述中将进一步理解本发明的其它方面和优点。

附图说明