[发明专利]治疗同型半胱氨酸尿症的酶替代疗法优化

权利要求书

1.一种PEG化在SEQ ID NO:1氨基酸位置15处具有半胱氨酸至丝氨酸的突变的人截短的胱硫醚β合酶(CBS)蛋白或其变体(htCBS C15S)的方法，所述方法包括：

(a)将htCBS C15S与溶液中的一个或多个NHS酯PEG分子以摩尔比过量至约40倍的NHS酯PEG分子缀合以产生一个批次，其中多个NHS酯PEG分子为5kDa、10kDa或20kDa NHS酯PEG分子；

(b)将该批次的尺寸排阻色谱-高效液相色谱(SEC-HPLC)分析的色谱图的保留时间与具有可接受的PEG化的htCBS C15S的SEC-HPLC分析的色谱图的保留时间进行比较以鉴定PEG化不足，其中PEG化不足的批次的保留时间大于具有可接受的PEG化的htCBS C15S的保留时间；和

(c)向该批次中添加另外的NHS酯PEG分子，以减少该批次中的PEG化不足的量，从而使htCBS C15S PEG化。

2.一种PEG化在SEQ ID NO:1氨基酸位置15处具有半胱氨酸至丝氨酸的突变的人截短的胱硫醚β合酶(CBS)蛋白或其变体(htCBS C15S)的方法，所述方法包括：

(a)将htCBS C15S与溶液中的一个或多个NHS酯PEG分子以摩尔比过量小于约40倍的NHS酯PEG分子缀合以产生一个批次，其中多个NHS酯PEG分子为5kDa、10kDa或20kDa NHS酯PEG分子；

(b)将该批次的非还原毛细管电泳(NR-CE)分析的保留时间与具有可接受的PEG化的htCBS C15S的NR-CE分析的保留时间进行比较以鉴定PEG化不足，其中PEG化不足的批次的保留时间小于具有可接受的PEG化的htCBS C15S的保留时间；和

(c)向该批次中添加另外的NHS酯PEG分子，以减少该批次中的PEG化不足的量，从而使htCBS C15S PEG化。

3.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中NHS酯PEG分子以约10倍的摩尔过量存在。

4.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中NHS酯PEG分子以约20倍的摩尔过量存在。

5.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中NHS酯PEG分子以小于20倍、小于10倍、小于5倍或小于2倍的摩尔过量存在。

6.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中一个或多个NHS酯PEG分子由5kDa NHS酯(5NHS)PEG分子组成。

7.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中一个或多个NHS酯PEG分子由10kDa NHS酯(10NHS)PEG分子组成。

8.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中一个或多个NHS酯PEG分子由20kDa NHS酯(20NHS)PEG分子组成。

9.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中多个NHS酯PEG分子中的每一个均由小于约20kDa的PEG分子组成。

10.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中PEG化不足的htCBS C15S包含少于15个、少于10个、少于5个或少于1个PEG化的氨基酸。

11.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中具有可接受的PEG化的htCBS C15S包含至少1个PEG化的氨基酸。

12.根据权利要求1所述的方法，其中PEG化不足的htCBS C15S批次的保留时间大于约9.50分钟、约9.75分钟、约10.00分钟和约10.25分钟。

13.根据权利要求12所述的方法，其中PEG化不足的htCBS C15S批次的保留时间介于约9.60分钟至约9.70分钟间。