[发明专利]用于纯化和扩增核酸的系统和方法

权利要求书

1.一种纯化和检测核酸扩增产物的方法，所述方法包括

a.将具有未纯化的核酸的样品递送到微流体区域；

b.使所述核酸与所述微流体区域中的固定的表面接触，其中所述核酸附着于所述表面；

c.用第一缓冲液洗涤所述微流体区域和表面；

d.用第二缓冲液洗涤所述微流体区域和表面，其中所述第二缓冲液具有等于或高于所述第一缓冲液的pH；

e.扩增所述核酸中的至少一些以产生扩增产物；和

f.检测所述扩增产物；

其中将所述核酸递送至所述微流体区域的步骤使用包含亲液盐和任选的核酸酶抑制剂的附着溶液，并且其中所述附着溶液不含离液盐和乙醇。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一缓冲液还包含NaCl并且具有1至4.5的pH。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二缓冲液具有1至4.5的pH，并且不含有亲液盐。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品是生物样品，所述方法还包括裂解所述生物样品中的病毒和/或细胞以将未纯化的核酸释放到溶液中，作为将所述核酸递送到微流体区域中的步骤的一部分。

5.根据权利要求1所述的方法，其中使所述核酸与所述微流体区域中的固定的表面接触的步骤包括在20℃-80℃之间的温度下在所述微流体区域中对核酸进行温育。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述固定的表面包含金属氧化物或金属氮化物或氧化硅或氮化硅。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述金属氧化物是氧化铝(Al₂O₃)或氧化铪(HfO₂)。

8.根据权利要求4所述的方法，其中裂解所述生物样品中的病毒和/或细胞的步骤包括：通过加热所述附着缓冲液中的所述生物样品、或者通过将所述附着缓冲液中的所述生物样品暴露于化学组合物使得发生裂解来释放核酸，其中所述化学组合物任选地包含0.1％-1.0％SDS和/或0.1％-0.5％NP-40洗涤剂。

9.根据权利要求8所述的方法，其中在所述微流体区域中的附着缓冲液中加热所述生物样品。

10.一种用于微流体扩增测定的亲液溶液，其中所述亲液盐是KH₂PO₄、或(NH₄)₂SO₄、K₂SO₄，所述溶液任选地包含1％-35％DMSO。

11.一种使用权利要求1所述的方法纯化和扩增核酸序列的系统，所述系统包括：微流体反应器，所述微流体反应器具有至少一个具有金属氧化物涂层或氧化硅(SiO₂)涂层或氮化硅涂层的固定的表面，所述涂层基本上由氧化铝(Al₂O₃)、氧化铪(HfO₂)、氮化硅(Si₃N₄)或氧化硅(SiO₂)组成。

12.根据权利要求11所述的系统，其中所述至少一个表面存在于所述微流体反应器中的多个微柱上。

13.根据权利要求12所述的系统，其中所述多个微柱具有以下特征中的至少一个：i)约190μm-200μm的微柱高度；ii)约20μm的微柱宽度；约50μm的中心至中心的微柱距离；iii)约30μm的柱间距离。

14.根据权利要求13所述的系统，其中所述多个微柱中的至少一些与多核苷酸非共价缔合。