[发明专利]增强肺炎链球菌多糖-蛋白缀合物的免疫原性

说明书

本发明提供了具有一种或多种多糖‑蛋白缀合物的免疫原性组合物，其中来自肺炎链球菌细菌荚膜的一种或多种多糖在非质子溶剂如二甲基亚砜(DMSO)中与载体蛋白缀合。本发明还提供了对肺炎球菌多糖蛋白缀合物疫苗提供增强的免疫应答的方法，其包括向人受试者施用包含在DMSO条件下制备的多糖‑蛋白缀合物的免疫原性组合物。

技术领域

本发明提供了免疫原性组合物，其包含至少一种在非质子溶剂如二甲基亚砜(DMSO)中使用还原胺化与CRM₁₉₇缀合的肺炎链球菌多糖。本发明还提供了增强具有一种或多种多糖-蛋白缀合物的免疫原性组合物的免疫原性的方法，其中使用在非质子溶剂如DMSO中进行的还原胺化将来自肺炎链球菌细菌荚膜的一种或多种多糖与载体蛋白缀合。

背景技术

肺炎链球菌是一种革兰氏阳性细菌，是婴幼儿中侵袭性细菌性疾病(如肺炎、菌血症、脑膜炎和中耳炎)的最常见原因。肺炎球菌用化学连接的多糖包封，其赋予血清型特异性。已有超过90种已知的肺炎球菌血清型，并且荚膜是肺炎球菌的主要毒力决定因素，因为荚膜不仅保护细菌的内表面免受补体影响，而且本身具有很差的免疫原性。多糖是T细胞非依赖性抗原，不能在MHC分子上加工或呈递以与T细胞相互作用。然而，它们可以通过另一种机制刺激免疫系统，该机制涉及B细胞上表面受体的交联。

2岁以下的儿童不会对大多数多糖疫苗产生免疫反应，因此有必要通过化学缀合至蛋白质载体而使多糖具有免疫原性。将多糖(T细胞非依赖性抗原)与蛋白质(T细胞依赖性抗原)偶联，赋予多糖T细胞依赖性的性质，包括同种型转换、亲和力成熟和记忆诱导。

已经有许多缀合反应用于将多糖共价连接至蛋白质。三种较常用的方法包括：1)还原胺化，其中反应的一个组分上的醛或酮基团与另一个组分上的氨基或酰肼基团反应，并且形成的C＝N双键随后被还原剂还原为C-N单键；2)氰基化缀合，其中多糖被溴化氰(CNBr)或1-氰基-4-二甲基氨基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化以将氰酸酯基团引入羟基，其在加入蛋白质组分后与氨基或酰肼形成共价键；和3)碳二亚胺反应，其中碳二亚胺活化缀合反应的一个组分上的羧基，并且活化的羰基与另一组分上的氨基或酰肼基反应。这些反应也经常用于在缀合反应之前活化缀合物的组分。

还原胺化已被用于缀合肺炎链球菌多糖。参见，例如，美国专利号8,192,746，美国专利申请公开号20170021006以及国际专利申请公开号WO2011/110381和WO2015/110941。还原胺化包括两个步骤：(1)抗原的氧化，和(2)还原抗原和载体蛋白以形成缀合物。还原步骤可以在含水溶剂或非质子溶剂如DMSO中进行。参见，例如，国际专利申请公开号WO2016/113644。

发明内容

本发明提供了免疫原性组合物，其包含与载体蛋白缀合的来自肺炎链球菌血清型1，2，3，4，5，6C，6D，7B，7C，8，9N，9V，11A，12F，14，15A，15C，16F，17F，18C，20，21，22A，23A，23B，24F，27，28A，31，34，35A，35B，35F和38中的一种或多种的多糖，其中将所述多糖缀合至所述载体蛋白的缀合反应是在非质子溶剂中。在一个实施方式中，对于具有相同血清型的组合物，与在水性条件下制备的相同的一种或多种血清型相比，在非质子溶剂中制备的一种或多种血清型具有增加的免疫原性。

本发明提供了免疫原性组合物，其包含由与载体蛋白缀合的肺炎链球菌血清型1，2，3，4，5，6C，6D，7B，7C，8，9N，9V，11A，12F，14，15A，15C，16F，17F，18C，20，21，22A，23A，23B，24F，27，28A，31，34，35A，35B，35F和38中的一种或多种制备的多糖蛋白缀合物，其中所述多糖蛋白缀合物是通过包括在非质子溶剂中将多糖与载体蛋白质缀合的步骤的方法制备的。