[发明专利]新型重组双功能融合蛋白及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种重组双功能融合蛋白，其特征在于，所述重组双功能融合蛋白由如下组成：

第一结合结构域(D1)；和

第二结合结构域(D2)；

其中，所述第一结合结构域为抗CD20单克隆抗体，并且所述抗CD20单克隆抗体包括SEQID NO.5所示的重链可变区和SEQ ID NO.7所示的轻链可变区，

所述第二结合结构域为人SIRPα膜外端第一个功能区（SIRPα-Domain 1，SD1），并且所述第二结合结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示；

并且所述 D2连接在D1的重链可变区起始端，所述D1和所述D2通过连接肽GGGGSGGGGS相连。

2.如权利要求1所述的重组双功能融合蛋白，其特征在于，所述重组双功能融合蛋白为同源二聚体。

3.如权利要求1所述的重组双功能融合蛋白，其特征在于，所述抗CD20单克隆抗体包括通过二硫键连接的四条多肽链（两条重链及两条轻链），并且D2连接在所述抗CD20单克隆抗体的重链N端；

其中，所述重链与D2连接形成的多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示，所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示。

4.一种多核苷酸，其特征在于，它编码如权利要求1所述的重组双功能融合蛋白。

5.如权利要求4所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求3所述的重组双功能融合蛋白；

其中，编码所述重链与D2连接形成的多肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，编码所述轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。

6.一种载体，其特征在于，它含有权利要求4所述的多核苷酸。

7.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求6所述的载体或基因组中整合有权利要求4所述的多核苷酸。

8.一种免疫偶联物，其特征在于，该免疫偶联物含有：

(a) 如权利要求1所述的重组双功能融合蛋白；和

(b) 选自下组的偶联部分：可检测标记物或药物。

9.如权利要求8所述的免疫偶联物，其特征在于，所述偶联部分包括毒素、细胞因子、酶、放射性核素。

10.一种药物组合物，其特征在于，它含有：

(i) 如权利要求1所述的重组双功能融合蛋白、或如权利要求8所述的免疫偶联物；以及

(ii)药学上可接受的载体。

11.如权利要求10所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物的剂型为注射剂型。

12.如权利要求1所述的重组双功能融合蛋白、或如权利要求8所述的免疫偶联物的用途，其特征在于，用于制备药物,所述药物用于治疗或预防表达CD20蛋白的肿瘤。

13.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述肿瘤包括：胃癌、淋巴瘤、肝癌、白血病、肾脏肿瘤、肺癌、小肠癌、骨癌、前列腺癌、结直肠癌、乳腺癌、大肠癌、前列腺癌、或肾上腺肿瘤。

14.一种重组双功能融合蛋白的制备方法，其特征在于，该方法包含：

(a) 在适合表达的条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞；

(b) 从培养物中分离出如权利要求1所述的重组双功能融合蛋白。