[发明专利]一种用胶乳免疫比浊法测定载脂蛋白C3的试剂盒

说明书

本发明公开了一种测定载脂蛋白C3的试剂盒，试剂盒含有试剂R1、试剂R2和校准品，其中试剂R1组成为：缓冲液、电解质、表面活性剂、反应增强剂、稳定剂、防腐剂；试剂R2组成为：缓冲液、羊抗人载脂蛋白C3抗体胶乳颗粒、电解质、表面活性剂、稳定剂、防腐剂；校准品组成为：缓冲液、重组载脂蛋白C3、牛血清白蛋白、甘露糖醇、叠氮钠。本发明的载脂蛋白C3试剂盒为液体双试剂，无需复溶配制，开瓶可以直接使用。得到的胶乳颗粒稳定性较好，大大提升了检测结果的准确性；利用高碘酸钠将载脂蛋白C3抗体的Fc端的残糖基氧化为醛基，提高抗体的结合率和稳定性，有效保护抗体与抗原结合的活性区域，提高了检测试剂的灵敏度和稳定性。

技术领域

本发明涉及医学免疫体外诊断试剂领域，具体涉及一种用胶乳免疫比浊法测定载脂蛋白 C3的试剂盒。

背景技术

载脂蛋白是个庞大的家族，包括A、B、C、E等家族，载脂蛋白是一类特殊的蛋白质，在脂质转运过程中，必须和载脂蛋白结合后，才能正常转运。

载脂蛋白C3是由79个氨基酸组成的糖蛋白，在C族中浓度最高，主要调节高三酰甘油血症中的三酰甘油脂蛋白（TRLs）的分解与代谢，主要在富含三酰甘油的脂蛋白（TRLs）中存在，包括极低密度脂蛋白和乳糜微粒，极少部分存在于高密度脂蛋白。载脂蛋白主要在肝脏合成，少部分在肠道合成，乳糜微粒及极低密度脂蛋白通过脂蛋白脂酶（LPL）在毛细血管及肝外组织水解成脂蛋白残余物，最终，肝脏通过受体介导机制重新将残余物摄取，而血浆载脂蛋白C3通过对LPL的辅因子的非竞争性的抑制作用而阻断TRLs水解，同时可抑制肝脏对TRLs残余物的摄取，从而使得TRLs及其残余物在血浆滞留时间延长，血浆三酰甘油水平升高。此外，载脂蛋白还可调节肠道脂质吸收，促进肝脏合成和分泌富含三酰甘油的极度密度脂蛋白，这些作用使载脂蛋白C3成为高三酰甘油症的重要因素。除了升高三酰甘油的水平外，载脂蛋白还导致内皮功能障碍并使其黏连性增加，并有致动脉粥样硬化的作用，LDL和HDL的上的载脂蛋白C3含量决定了动脉粥样硬化的程度。因此测定血清载脂蛋白 C3 含量对研究血脂代谢类疾病有重要意义。

载脂蛋白C3测定方法主要有酶联免疫法和免疫比浊法。酶联免疫法需要手工操作，耗时较长，步骤比较繁琐，价格不菲。免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法，当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。免疫比浊法不需要昂贵的设备，可广泛的应用于全自动生化分析仪，测定大量标本，因此受到临床广泛推广。在普通的免疫比浊法（例如CN 103076454 A中所公开的试剂盒）中，样品中的抗原抗体交联能力有限，形成的免疫复合物的数量、大小也有限，检测的灵敏度会较低，而加大抗体抗原的用量又会增加检测成本。胶乳免疫比浊技术属于普通免疫比浊技术的衍生技术，其本质和普通免疫比浊技术一样，通过在反应体系中检测抗原抗体形成的免疫复合物来分析样品中的待测物，但其通过抗体偶联胶乳微球来放大反应信号。常用的制备胶乳-抗体蛋白复合物的方法有两种，物理吸附法和化学偶联法，物理吸附法会引起胶乳微球表面蛋白的部分解析及结构的变化，制备的胶乳-抗体蛋白复合物的特异性较低，容易受其它物质（比如类风湿因子和嗜异性抗体）的干扰，在生物诊断中的应用受到限制，而化学偶联法能最大限度控制吸附中出现的问题，但化学偶联法连接抗体的Fab片段和Fc具有随机性，进而影响试剂的灵敏度和稳定性。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种灵敏度高及稳定性好，生产成本低的用胶乳免疫比浊法测定载脂蛋白 C3的试剂盒。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种用胶乳免疫比浊法测定载脂蛋白 C3的试剂盒，该试剂盒含有试剂R1、试剂R2和校准品，其中试剂R1组成为：

缓冲液 10~200mmol/L