[发明专利]一种GGT抗体免疫纳米磁珠及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种GGT抗体免疫纳米磁珠，其特征在于：所述GGT抗体免疫纳米磁珠为核壳型结构，内核为磁性材料Fe₃O₄，中间层为高聚物脂质体，最外层为GGT抗体；所述高聚物脂质体为羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐和胆固醇的混合物。

2.根据权利要求1所述的一种GGT抗体免疫纳米磁珠，其特征在于：羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐和胆固醇、磁性材料Fe₃O₄和GGT抗体的质量比为15~20：12~16：36~48：1。

3.根据权利要求2所述的一种GGT抗体免疫纳米磁珠，其特征在于：羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐、胆固醇、磁性材料Fe₃O₄和GGT抗体的质量比为20：15：42：1。

4.一种GGT抗体免疫纳米磁珠的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

①将羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐、1,2-二油酰基磷脂酰胆碱和胆固醇分别溶于二氯甲烷中，备用；

②将N-N-羟基琥珀酰亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐分别溶于双蒸水中摇匀，备用；

③分别吸取步骤①中配制的羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐、1,2-二油酰基磷脂酰胆碱和胆固醇的二氯甲烷溶液，加入烧瓶中，置于2~6℃的环境中备用；

将油溶性Fe₃O₄磁珠加入至烧瓶中，然后向烧瓶中加入pH7.2~7.4磷酸盐缓冲溶液，摇晃均匀，然后将烧瓶置于超声波细胞粉碎机中超声后，除去二氯甲烷，然后向烧瓶中加入步骤②配制的N-N-羟基琥珀酰亚胺双蒸水和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐双蒸水，混匀，然后向烧瓶中加入GGT抗体，在2~6℃下反应10~15小时，得到GGT抗体免疫纳米磁珠。

5.根据权利要求4所述的一种GGT抗体免疫纳米磁珠的制备方法，其特征在于：步骤①中羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐、1,2-二油酰基磷脂酰胆碱和胆固醇与二氯甲烷的质量体积比均为3~5mg：1mL。

6.根据权利要求4所述的一种GGT抗体免疫纳米磁珠的制备方法，其特征在于：步骤②中N-N-羟基琥珀酰亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与双蒸水的质量体积比为1~3mg：1mL。

7.根据权利要求4所述的一种GGT抗体免疫纳米磁珠的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

①将羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐、1,2-二油酰基磷脂酰胆碱和胆固醇分别溶于二氯甲烷中，备用；其中羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐、1,2-二油酰基磷脂酰胆碱和胆固醇与二氯甲烷的质量体积比均为3~5mg：1mL；

②将N-N-羟基琥珀酰亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐分别溶于双蒸水中摇匀，备用；其中N-N-羟基琥珀酰亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与双蒸水的质量体积比为1~3mg：1mL；

③分别吸取步骤①中配制的羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐、1,2-二油酰基磷脂酰胆碱和胆固醇的二氯甲烷溶液，加入烧瓶中，置于2~6℃的环境中备用；

将油溶性Fe₃O₄磁珠加入至烧瓶中，然后向烧瓶中加入pH7.2~7.4磷酸盐缓冲溶液，摇晃均匀，然后将烧瓶置于超声波细胞粉碎机中超声后，除去二氯甲烷，然后向烧瓶中加入步骤②配制的N-N-羟基琥珀酰亚胺双蒸水溶液和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐双蒸水溶液，混匀，然后向烧瓶中加入GGT抗体，得到混合液，将混合液在2~6℃下反应10~15小时，得到GGT抗体免疫纳米磁珠；

混合液中羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐、1,2-二油酰基磷脂酰胆碱、胆固醇、油溶性Fe₃O₄磁珠、N-N-羟基琥珀酰亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和GGT抗体的质量比为15~20：12~16：12~16：36~48：140~200：240~320：1。

8.一种GGT抗体免疫纳米磁珠的应用，其特征在于：快速富集胶质细胞瘤循环肿瘤细胞。