[发明专利]黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒及检测方法

说明书

一种黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒及检测方法，黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒，包括：酶标板、黄曲霉毒素B₁标准品溶液、黄曲霉毒素B₁抗体工作液、酶标二抗工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩稀释液和浓缩洗涤液；所述底物液A为含有0.5mmol/L的过氧化氢脲的柠檬酸‑磷酸氢二钠缓冲溶液；所述底物液B为四甲基联苯二胺的乙醇溶液；所述终止液为2mol/L的硫酸水溶液；所述酶标板包被有黄曲霉毒素B1包被抗原；所述黄曲霉毒素B1包被抗原通过黄曲霉毒素B1抗原与牛血清白蛋白偶联得到。相对于传统的检测方法，上述试剂盒的检测方法，检测过程及样品处理过程都相对较为简单，检测过程和操作都较为便捷。

技术领域

本申请涉及真菌毒素检查技术领域，特别是涉及一种黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒及检测方法。

背景技术

黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉的有毒的代谢产物，黄曲霉毒素是目前已知的最强致癌物之一，其毒性大于氰化物、砷化物等的毒性。目前已经发现的黄曲霉毒素有二十多种，黄曲霉毒素对人类造成健康威胁的主要是黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂、M₁和M₂。黄曲霉毒素主要存在于谷物、坚果和饲料中。1993年黄曲霉毒素B₁被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物，是一类毒性极强的剧毒物质。它被证明对人和动物的肝脏、肾脏等组织和器官具有很大的危害。我国规定：黄曲霉毒素B₁在玉米、大米和小麦中限量分别不得超过20μg/kg、10μg/kg和5μg/kg，各种饲料中黄曲霉毒素B₁的限量标准为10μg/kg-50μg/kg。

目前，市场上的黄曲霉毒素的检测方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、酶联免疫吸附法等，上述检测方法检测过程和操作过程都较为麻烦，无法适应大样本检测。

发明内容

基于此，有必要提供一种检测过程和操作较为便捷的黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒及检测方法。

一种黄曲霉毒素酶联免疫试剂盒，包括：酶标板、黄曲霉毒素B₁标准品溶液、黄曲霉毒素B₁抗体工作液、酶标二抗工作液、底物液A、底物液B、终止液、浓缩稀释液和浓缩洗涤液；

其中，所述底物液A为含有0.5mmol/L的过氧化氢脲的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液；

所述底物液B为四甲基联苯二胺的乙醇溶液；

所述终止液为2mol/L的硫酸水溶液；

所述浓缩稀释液为磷酸盐缓冲液；

所述浓缩洗涤液包括磷酸盐吐温缓冲液；

所述酶标板包被有黄曲霉毒素B₁包被抗原；所述黄曲霉毒素B₁包被抗原通过黄曲霉毒素B₁抗原与牛血清白蛋白偶联得到。

在其中一个实施例中，所述浓缩稀释液为10倍浓缩稀释液，用于稀释十倍时使用。

在其中一个实施例中，所述浓缩洗涤液为10倍浓缩洗涤液，用于稀释十倍时使用。

在其中一个实施例中，所述黄曲霉毒素B₁抗体工作液通过采用黄曲霉毒素B₁包被抗原作为免疫原制备得到单克隆抗体，用抗体稀释液稀释成1：10000比例制备得到。

在其中一个实施例中，所述酶标二抗工作液通过羊抗鼠抗体加抗体稀释液按1：2000稀释制备得到。

在其中一个实施例中，所述黄曲霉毒素B₁抗原的制备方法包括如下步骤：