[发明专利]一种骨肉瘤生物标记物环状RNA-circ_0006633及其应用

说明书

本发明提供一种骨肉瘤生物标记物环状RNA‑circ_0006633及其应用，所述环状RNA‑circ_0006633可作为骨肉瘤生物标记物，应用于制备骨肉瘤诊断工具或骨肉瘤预后评估工具，特异性高，周期短，易于临床推广，对临床骨肉瘤的诊治、预后评估具有重要的临床意义。

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及一种骨肉瘤生物标记物环状RNA-circ_0006633及其应用。

背景技术

骨肉瘤是最常见的原发恶性骨肿瘤之一，占原发性恶性骨肿瘤的35％左右，好发于青少年。骨肉瘤的恶性程度极高，早期即可出现转移，大约15-20％的患者在出现症状首次就诊时就已发生了转移，而转移往往意味着患者预后不佳。在上世纪80年代以前，骨肉瘤患者的5年生存率仅为20％左右，80年代以后随着外科技术的进步及化疗等各种辅助治疗手段的出现，骨肉瘤患者的5年生存率提高到60-70％。尽管如此，中老年骨肉瘤患者的预后仍然不容乐观，已有的报道显示不同年龄段骨肉瘤患者的生存率不同，小于30岁的骨肉瘤患者5年生存率为60％左右，30-49岁患者的5年生存率为50％左右，大于50岁患者的5年生存率为30％左右。更值得注意的是，尽管在上世纪80年代随着骨肉瘤综合治疗的应用，骨肉瘤患者的生存期得以延长，但是在最近的20年里，骨肉瘤患者的5年生存率没有显著的提高，仍然需要新的防治策略以进一步改善骨肉瘤患者的预后，降低其死亡风险和社会危害。因此在提高骨肉瘤治疗手段的同时，从分子水平探索骨肉瘤发生、复发和转移的机制，为骨肉瘤的早期诊断、治疗和预后评估奠定基础，具有重要的科学和社会意义。

环状RNA(circular RNA)是近来非编码RNA领域的研究热点，是一类稳定的环形RNA分子。早在1993年就有报道发现人细胞中有一些由外显子形成的环状RNA分子，在当时被认为是转录错误形成的分子。近年来，随着高通量RNA测序和生物信息学技术的发展，环状RNA研究领域进展较快，大量的环状RNA分子在许多物种中被鉴定出来。环状RNA大多数定位于细胞浆中，主要通过外显子反向剪接成环形成。高通量测序结果发现有三种类型的环状RNA：外显子形成的环状RNA，内含子形成的环状RNA及外显子、内含子共同形成的环状RNA。外显子成环占的比例最大，报道的比较经典的成环方式为形成套索结构和内含子配对。虽然环状RNA整体的丰度不高，但已有研究表明环状RNA与心血管疾病、肿瘤等相关，其在外泌体中也保持稳定。目前，环状RNA的具体作用机制还不清楚，包括RNA-circ_0006633(chr1:59805629-59844509)在骨肉瘤中的相关报道几乎没有，其在骨肉瘤干细胞中的鉴定、功能及分子机制都有待深入研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种骨肉瘤生物标记物环状RNA-circ_0006633及其应用，将环状RNA-circ_0006633应用于骨肉瘤疾病的诊治、预后，特异性高，周期短，易于临床推广。

本发明首次发现环状RNA-circ_0006633对骨肉瘤的生物学行为具有重要的调控作用，进一步，将circ_0006633应用于骨肉瘤的诊治及预后，对临床骨肉瘤的诊治、预后评估具有重要的临床意义。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供的环状RNA-circ_0006633作为骨肉瘤生物标记物中的应用。

本发明还提供环状RNA-circ_0006633在制备骨肉瘤诊断工具或骨肉瘤预后评估工具中的应用，即检测样本组织中circ_0006633表达水平(含量或表达量)的产品在制备骨肉瘤诊断工具或骨肉瘤预后评估工具中的应用。

优选的，所述检测样本组织中circ_0006633表达水平的产品包括RT-PCR、实时荧光定量PCR。

进一步，所述用RT-PCR检测环状RNA-circ_0006633表达水平的产品至少包括一对特异性扩增circ_0006633的引物；所述用实时定量PCR检测环状RNA-circ_0006633表达水平的产品至少包括一对特异性扩增circ_0006633的引物。