[发明专利]溆浦鹅肥肝关联的A-FABP基因及分子标记方法

说明书

本发明公开了一种脂肪型脂肪酸结合蛋白基因A‑FABP及其作为溆浦鹅肥肝性状的遗传标记，通过测定溆浦鹅肥肝大小，并筛选溆浦鹅A‑FABP基因多态性，然后将A‑FABP基因多态性与肥肝性状关联分析，其A‑FABP分子标记的序列如SEQ ID NO:1所示。在SEQ ID NO:1的76bp处存在一个C/T碱基突变，CC基因型溆浦鹅肝脏大小显著高于CT基因型个体。本发明为溆浦鹅肥肝性状的标记辅助选择提供了分子标记。

技术领域

本发明属于家禽分子生物技术及育种领域，主要是测定溆浦鹅肥肝性状相关的遗传标记，具体地说是，是测定A-FABP基因中的多态性，即与溆浦鹅肥肝性状相关的脂肪性脂肪酸结合蛋白基因的单核苷酸多态性(Singlenucleotide polymorphism，缩写为SNP)的存在。

技术背景

溆浦鹅是我国肥肝性能最优，体型大，生长快，抗病性强，优势特别明显的国家级地方品种遗传资源，2014年进入国家级畜禽遗传资源保护名录。鹅肥肝是世界级高档美味健康食品中三大珍品之一，其所富含的不饱和脂肪酸、亚油酸、卵磷脂等对软化血管、降低血脂、预防心脑血管疾病的发生具有重要保健作用。由于溆浦鹅缺乏科学系统选育，导致填肥后肝脏大小个体差异大，严重制约了鹅产业化生产效率、产品品质和经济效益。及常规方法选育较慢，随着生物分子技术的发展，使得我们能够从DNA水平寻找与溆浦鹅肥肝性状相关的主效基因或分子标记，并在育种中将其应用于标记辅助选择，可提高选育进程，获得更大的经济效应。

脂肪型脂肪酸结合蛋白(adipocyte fatty acid binding protein,A-FABP)又称为脂肪酸结合蛋白4(FABP4)或A-FABP，是脂肪酸结合蛋白(FABPs)家族中的一员。A-FABP属于膜周边蛋白，在许多组织中表达，特别是与脂质代谢相关的脂肪组织中，能可逆的结合长链脂肪酸，在脂肪酸的合成、运输和代谢过程中起着重要的作用。Gerbens等对纯种杜洛克的研究表明，A-FABP多态性与肌内脂肪含量存在显著相关。国内也有相关研究，罗桂芬等在鸡A-FABP基因多态性分析及其与脂肪性状相关研究中，对A-FABP基因进行SNPs检测和基因型与性状的关联分析。结果发现，A-FABP不同基因型间腹脂率、皮脂厚、肌内脂肪含量差异极显著。叶满红在矮脚鸡上的研究表明，A-FABP基因第一外显子和第一内含子上单碱基变异对脂肪沉积有显著影响。杨志刚等研究发现，在朗德鹅A-FABP基因内含子2上存在单碱基突变，与肥肝性能显著相关。由此可见，A-FABP基因与脂肪沉积密切相关。

目前，关于A-FABP基因多态性的研究主要集中在与肌内脂肪含量的关联分析，与肥肝性能的关联分析相对较少。溆浦鹅DNA遗传标记、遗传多样性和相关功能基因的研究仍处于起步阶段，关于溆浦鹅肥肝脂肪沉积相关的遗传标记尚未见报道。

发明内容

针对上述现有技术的不足，提供一种A-FABP基因及其作为溆浦鹅肥肝性状遗传标记的用途；同时筛选与溆浦鹅肥肝性状相关的SNP，以期应用于标记辅助选择或标记辅助渗入，并提供上述遗传标记在溆浦鹅标记辅助选择中的应用。

本发明是这样实现的，一种A-FABP基因，所述基因为与表示溆浦鹅肥肝性状相关的基因，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所述。序列表SEQ ID NO:1的76bp处有1个C/T的碱基突变，导致多态性存在。所用引物对如下：

正向引物：5’—CTGCCCAAGTCCAGAGTCCAT—3’

反向引物：5’—TGCGGTCATTAGCCCATACAC—3’

本发明的另一目的在于提供一种用A-FABP基因作为溆浦鹅肥肝性状相关遗传标记的方法，方法包括如下步骤：

(1)根据GenBank中鹅A-FABP基因的序列，用Primer 5.0设计引物，覆盖该基因全部外显子4及部分3'非翻译区序列；