[发明专利]心脑血管疾病药物相关基因分型检测引物组、试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及基因工程及分子生物学领域，提供一种心脑血管疾病药物相关基因分型检测引物组，用于对含待测位点的核酸片段进行特异性扩增，所述待测位点包括CYP2C9基因rs1799853位点、CYP2C9基因rs1057910位点、CYP4F2基因rs2108622位点等，所述引物组包括rs1799853引物组、rs1057910引物组、rs2108622引物组等。本发明还提供了一种基因检测试剂盒及检测方法。本发明的基因检测引物组能够对含上述待测位点的核酸片段进行特异性扩增，使得基因突变检测灵敏度高、假阳性率低；本发明采用第二代高通量基因测序技术对待测位点的基因型进行检测，使得检测周期短，通量高。

技术领域

本发明涉及基因工程及分子生物学领域，更具体地说，涉及一种心脑血管疾病药物相关基因分型检测引物组、试剂盒及检测方法。

背景技术

研究表明，目前广泛使用的心脑血管疾病药物，例如华法林、洛沙坦、氯吡格雷、普拉格雷、替卡格雷、美托洛尔、叶酸等针对不同个体基因类型有不同的治疗效果。

CYP4F2*3多态性与华法林稳态剂量相关。CYP4F2*3多态性可导致酶活性降低，维生素K浓度升高，华法林的抗凝效果增强。携带CYP4F2*3等位基因的个体应用华法林时出血的风险显著增加。CPIC指南建议降低CYP4F2*3纯合子基因型个体华法林及香豆素类抗凝药（醋硝香豆素、苯丙香豆素）的用药剂量。

华法林是深静脉血栓、心房纤颤等疾病的一线用药，血药浓度过高或敏感性增加可导致严重出血事件。CYP2C9*2和CYP2C9*3多态性均导致CYP2C9酶活性降低，使华法林口服清除率下降，因此华法林的给药剂量针对这类个体需相应降低。中国人群中CYP2C9*2的频率为0％，CYP2C9*3的频率为3％。美国FDA推荐在使用华法林前进行CYP2C9基因检测。测定CYP2C9*3等位基因可用于指导中国人群确定华法林的起始用药剂量，并预测药物毒性，结合国际标准化比值（INR）检测值，估计华法林的维持剂量，确保用药安全。

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂是一类高血压治疗药物。在国内主要使用的有洛沙坦，其在体内主要经CYP2C9代谢活化为具有降压作用的代谢产物E-3174。携带CYP2C9*3等位基因的个体服用洛沙坦后E-3174的生成减少，洛沙坦的代谢率降低，导致洛沙坦的降压作用下降，需适当增加用药剂量以增强降压疗效。

维生素k氧化还原酶是抗凝药物华法林的作用靶点。VKORC1基因rs9923231多态性可影响VKORC1的表达，是导致华法林用药剂量个体差异的主要原因之一。VKORC1 -1639A等位基因个体对华法林的敏感性较高，应降低用药剂量。VKORC1 -1639A等位基因在亚洲人群中的等位基因频率为91.17％。美国FDA建议结合VKORC1和CYP2C9基因型考虑华法林的初始用药剂量。临床上也可根据考虑了VKORC1和CYP2C9基因型、年龄、身高、体重、种族、是否合用肝药酶诱导剂和是否合用胺碘酮等因素的剂量计算公式确定华法林初始用药剂量。

氯吡格雷又名波立维，是一种抗血小板药物，广泛用于急性冠脉综合征、缺血性脑血栓等引起的并发症。氯吡格雷主要经CYP2C19代谢活化后发挥抗血小板效应。CYP2C19遗传变异可导致酶活性的个体差异，使人群出现超快代谢者（UM）、快代谢者（EM）、中间代谢者（IM）和慢代谢者（PM）4种表型。EM个体只携带CYP2C19*1等位基因，IM个体携带CYP2C19*2或CYP2C19*3杂合子基因型；PM个体包括CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3和CYP2C19*3/*3基因型。CYP2C19 PM个体应用常规剂量的氯吡格雷后体内活性代谢物生产减少，对血小板的抑制作用下降。美国FDA和美国心脏病学会建议CYP2C19*1/*1基因型个体应用氯吡格雷有效，可常规使用；CYP2C19*2或*3基因型个体对氯吡格雷疗效降低，建议更换成普拉格雷或替卡格雷；CYP2C19*2或*3突变型纯合子个体应用氯吡格雷效果差，建议换用普拉格雷或替卡格雷。