[发明专利]一种连续流层析上样量的确定方法及其应用有效
| 申请号： | 201811524322.0 | 申请日： | 2018-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN109473143B | 公开（公告）日： | 2019-09-27 |
| 发明（设计）人： | 张赶;富敏霞;梁泊宁 | 申请（专利权）人： | 杭州奕安济世生物药业有限公司 |
| 主分类号： | G16B25/00 | 分类号： | G16B25/00;G16B40/00;C07K1/16 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 王焕 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市经济技术开*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 上样 层析 穿透 蛋白 穿透曲线 数据点 不同条件 分离纯化 公式计算 积分处理 抗体纯化 目标蛋白 便利性 上样液 可用 收率 应用 | ||
1.一种连续流层析上样量的确定方法，其特征在于，包括如下步骤：
将目标蛋白纯品制成上样液，上样获取穿透曲线，穿透曲线的X轴为动态结合载量，Y轴为C/C0；其中，C0为上样液的紫外吸收值，C为流出液的紫外吸收值；
按照公式计算蛋白穿透量Si＝(Xi-Xi-1)·(Yi+Yi-1)/2；其中Xi和Xi-1分别为穿透曲线中相邻数据点对应的动态结合载量，Yi和Yi-1分别为穿透曲线中相邻数据点对应的C/C0，n为正整数；
获取穿透曲线中C/C0＝a的数据点对应的动态结合载量为穿透载量b；获取蛋白穿透量Pn＝100b±10或Pn＝200b±10时的数据点对应的X，上样量为γ(X-b)或γ(X-2b)；其中，a≤5％，0.8≤γ≤1；
所述连续流层析的方式选自一柱拖一柱、一柱拖二柱、二柱拖二柱的上样方式；
当连续流层析的方式为一柱拖一柱串联方式时，蛋白穿透量Pn＝100b±10时的数据点对应的X，上样量为γ(X-b)；当连续流层析的方式为一柱拖二柱串联方式时，蛋白穿透量Pn＝200b±10时的数据点对应的X，上样量为γ(X-2b)；当连续流层析的方式为二柱拖二柱串联方式时，蛋白穿透量Pn＝100b±10时的数据点对应的X，上样量为γ(X-b)；
其中γ作为安全系数，避免实际操作造成的流穿，导致样品的流失。
2.根据权利要求1所述的连续流层析上样量的确定方法，其特征在于，所述γ满足：0.9≤γ≤1。
3.根据权利要求2所述的连续流层析上样量的确定方法，其特征在于，所述γ＝0.9。
4.根据权利要求2所述的连续流层析上样量的确定方法，其特征在于，根据所述穿透曲线获取数据点，每1mL所述上样液，所述数据点的数量＞300个。
5.根据权利要求1所述的连续流层析上样量的确定方法，其特征在于，所述a≤3％。
6.根据权利要求5所述的连续流层析上样量的确定方法，其特征在于，所述a≤2％。
7.根据权利要求6所述的连续流层析上样量的确定方法，其特征在于，所述a≤1％。
8.根据权利要求1所述的连续流层析上样量的确定方法，其特征在于，将所述目标蛋白纯品制成上样液，上样直至C/C0≥80％时，停止上样。
9.根据权利要求8所述的连续流层析上样量的确定方法，其特征在于，将所述目标蛋白纯品制成上样液，上样直至C/C0≥85％时，停止上样。
10.根据权利要求1所述的连续流层析上样量的确定方法，其特征在于，将所述目标蛋白纯品制成上样液，所述上样液的pH值与待分离目标蛋白粗品的pH值之比为0.97﹕1～1.03﹕1。
11.根据权利要求10所述的连续流层析上样量的确定方法，其特征在于，所述上样液的pH值与待分离目标蛋白粗品的pH值之比为0.98﹕1～1.02﹕1。
12.根据权利要求11所述的连续流层析上样量的确定方法，其特征在于，所述上样液的pH值与待分离目标蛋白粗品的pH值之比为1﹕1。
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