[发明专利]抗人Legumain蛋白的单克隆抗体、杂交瘤细胞株LGMN-2及其用途

说明书

本发明公开了抗人Legumain蛋白的单克隆抗体、杂交瘤细胞株LGMN‑2及其用途。本发明所提供的杂交瘤细胞株，名称为LGMN‑2，保藏号为CGMCC NO.12995。本发明所提供的抗人Legumain蛋白的单克隆抗体，由名称为LGMN‑2，保藏号为CGMCC NO.12995的杂交瘤细胞株分泌产生。本发明的单克隆抗体具有较高的效价，间接法效价最高达1:2.56×10⁸。本发明的单克隆抗体与Legumain同家族蛋白Cathepsin B，Cathepsin H和Cathepsin L无交叉反应，具有较好的特异性。

技术领域

本发明涉及生物医药工程技术领域，尤其涉及抗人Legumain蛋白的单克隆抗体、杂交瘤细胞株LGMN-2及其用途。

背景技术

Legumain(C13)(EC 3.4.22.34)又称天冬酰胺内肽酶(asparaginyl endopep-tidase，AEP)，是一种溶酶半胱氨酸蛋白酶，是半胱氨酸蛋白酶C13家族一个新成员。人的Legumain基因定位于14号染色体，编码由433个氨基酸残基组成的多肽链，去糖基化后成为具有生物活性的成熟酶，与小鼠具有83％的同源性。人的legumain蛋白具有3种形式，分别为56kD的酶原前体，46kD和36kD成熟酶。Legumain的活性催化中心是由组氨酸(His)和半胱氨酸(Cys)组成的催化二联体，是Legumain发挥催化活性所必需的，也是每一个C13家族成员必有的结构。

与正常组织相比，Legumain在小鼠和人类多种实体瘤组织中高表达，尤其是在肿瘤细胞、新生血管内皮细胞和肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-Associated Macrophages，TAMs)中，而在体外培养的相应肿瘤细胞株中却不表达。Liu等最先报道Legumain与肿瘤发生发展有关。他们通过Western blot和免疫组化分析，发现在多种鼠肿瘤细胞中，Legumain表达增高，而在体外培养的各肿瘤细胞株中则不表达。Liu等还检测了人正常组织及多种实体瘤组织，结果显示在正常组织中，Legumain表达极低，而在多种实体瘤组织中(如乳腺、结肠、肺、前列腺、卵巢肿瘤和中枢神经系统恶性肿瘤)Legumain高表达。

侵袭和转移是恶性肿瘤的播散方式，也是影响肿瘤患者的治疗效果和预后的重要因素。Legumain与整合素形成复合物，在实体肿瘤的低氧和酸性微环境中，具有激活肿瘤细胞Pro-MMP2和Pro-Cathepsin L的功能，促进肿瘤生长、侵袭和转移。为了证实Legumain的表达是否与肿瘤的分化程度、坏死、凋亡及预后相关。Murthy等通过Western blot和免疫组织化学方法，对164例原发性结肠癌、34例远端正常粘膜组织、89例癌旁组织及33例淋巴结转移癌组织样本进行临床病理检测，结果表明，在原发性结肠癌中，Legumain表达明显高于远端正常组织和癌旁组织(P<0.05)，但与淋巴结转移癌组织样本无显著差异(P>0.05)。同时，Legumain在肿瘤患者瘤体(P＝0.01)或基质中的表达(P＝0.04)水平较低时，其预后较好。利用这种相关性，可将Legumain作为疾病诊断和预后判断的指标之一。

Legumain作为一种新的生物学指标，目前临床上暂时没有针对其的检测方法，在监测肿瘤的发生发展中的应用还属空白。

发明内容

基于上述领域的空白，本发明提供了一种用于检测Legumain蛋白的试剂盒。

本发明所提供的用于检测Legumain蛋白的试剂盒，包括由如下单克隆抗体A和单克隆抗体B的组成的单克隆抗体对：

单克隆抗体A：由名称为LGMN-1，保藏号为CGMCC NO.12994的杂交瘤细胞株分泌产生；

单克隆抗体B：由名称为LGMN-2，保藏号为CGMCC NO.12995的杂交瘤细胞株分泌产生。

本发明还提供了一种杂交瘤细胞株，名称为LGMN-1，保藏号为CGMCC NO.12994。