[发明专利]一种基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备及检测方法

说明书

本发明属于生物克隆技术领域，公开了一种基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备及检测方法，在体外合成抗原多肽，对小鼠进行免疫，然后制备饲养细胞，培养骨髓瘤细胞，再制备免疫脾脏细胞，进行细胞融合，对杂交瘤细胞进行筛选，克隆化阳性杂交瘤细胞，然后对单克隆细胞进行大量制备。本发明目标蛋白质多肽抗原制备单克隆抗体方法，以及构建的血清蛋白检测试剂盒，比目前市售LBP试剂盒灵敏度检出率高10％。对应其他方法检测肝病、肾病指标，确定LBP的人体检测标准值；本发明利用质谱技术，设计制造用于检测人类LBP的质谱检测试剂盒，运用质谱技术检测LBP含量。

技术领域

本发明属于生物克隆技术领域，尤其涉及一种基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备及检测方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：

单克隆抗体具有特异性强、效价高、均质性、少或无血清交叉反应、易于大量生产、成本低等优点，它在疾病治疗和临床实践中具有极大的应用潜力。但迄今所获得的单克隆抗体多为鼠源性，对人而言具有较强的免疫原性，在人体内可引起较强的人抗鼠抗体反应，从而严重地限制了单克隆抗体在人体内的应用。此外，鼠源性单克隆抗体不能与人类抗体Fc受体结合。这也使得单克隆抗体在治疗方面陷入了低谷。随着重组DNA技术的发展，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体，部分或全人源化的单克隆抗体技术在全世界范围内发出了夺目的光彩。

嵌合单克隆抗体和由转基因小鼠、噬菌体展示技术、核糖体展示技术及共价展示技术所制备的单克隆抗体取得了激荡人心的丰硕成果。

综上所述，现有技术存在的问题是：

现有技术中，目标蛋白质多肽抗原制备单克隆抗体方法复杂，繁琐；以及构建的血清蛋白检测试剂盒，灵敏度检出率低。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备及检测方法，

本发明是这样实现的，一种基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备方法，所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备方法包括：

体外合成抗原多肽；

小鼠免疫；

制备饲养细胞；

培养骨髓瘤细胞；

制备免疫脾脏细胞；

细胞融合；

杂交瘤细胞筛选；

克隆化阳性杂交瘤细胞；

单克隆抗体的大量制备。

本发明的另一目的在于提供一种利用所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体制备方法制备的基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体。

本发明的另一目的在于提供一种应用于所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体的检测方法，所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体的检测方法包括：

1)抗体亚类的鉴定；

2)抗体效价测定；

3)检测标志蛋白的表达；

4)检测标志蛋白的mRNA表达；

5)标记抗体；

6)建立ELISA检测系统；

7)进行ELISA检测灵敏度与特异性实验。

本发明的另一目的在于提供一种利用所述基于目标蛋白多肽抗原的单克隆抗体的检测方法血清蛋白检测试剂盒。