[发明专利]一种益生菌中乳酸菌的检测方法

权利要求书

1.一种益生菌中乳酸菌的检测方法，其特征在于，所述乳酸菌为双歧杆菌、嗜热链球菌和乳杆菌的混合物，所述检测方法包括以下步骤：

1)将待测样品加入到添加有质量浓度为1%的牛血清白蛋白第五组分的PBS缓冲液中，均质，制成样品匀液，待测样品与PBS缓冲液的用量比为1g:9mL；将样品匀液混匀后再加入浓度为5%的乳糖溶液，乳糖溶液与待测样品的体积比为0.8︰1，经45℃水浴3min后得到样品菌液，在离心温度为4℃，离心转速为6000rpm条件下，离心3min分离除去上清液后得到菌悬液；

2)向步骤1）所得的菌悬液中加入浓度为5mg/mL的乳酸菌免疫磁珠，乳酸菌免疫磁珠与样品菌液的体积比为1︰50，经混合、振荡1min后于磁力架上静置2min分层，弃上层，对下层样品用浓度为0.02mol/L的PBS缓冲液进行洗脱，重复振荡、磁分离和洗脱过程2～3次，在洗脱后的乳酸菌免疫磁珠中加入PBS缓冲液，振荡重悬磁珠，得到样品待测液；所述乳酸菌免疫磁珠采用链霉亲和素修饰磁珠偶联生物素标记的乳酸菌抗体制得；所述乳酸菌抗体为双歧杆菌抗体、嗜热链球菌抗体和乳杆菌抗体按照重量比为4:3:3混匀后的混合物；

3)将样品待测液培养、观察、检测。

2.根据权利要求1所述的益生菌中乳酸菌的检测方法，其特征在于，所述乳酸菌免疫磁珠的制备方法，包括以下步骤：

a)用0.01mol/L磷酸盐-吐温20缓冲液稀释乳酸菌抗体至1mg/mL，用无水DMSO配制10mg/mL生物素N-羟基琥珀酰亚胺酯溶液，在生物素N-羟基琥珀酰亚胺酯溶液中加入稀释的乳酸菌抗体进行混合，生物素N-羟基琥珀酰亚胺酯溶液与乳酸菌抗体的体积比为4︰1，室温下孵育，即得生物素标记的乳酸菌抗体；

b)在生物素标记的乳酸菌抗体中加入1mg已活化溶解的链霉素亲和素修饰磁珠进行混合，得到抗体与磁珠的混合物，室温放置；

c)在步骤b)所得的混合物中加入9.6μL 1mol/L NH₄Cl溶液，室温孵育；上1ml的分子筛柱，以PBS缓冲液洗脱，收集1ml/管，加入PBS缓冲液与0.01%叠氮钠的混合液，置-20℃避光保存。

3.根据权利要求2所述的益生菌中乳酸菌的检测方法，其特征在于，所述步骤a)中磷酸盐-吐温20缓冲液的pH值为7.4。