[发明专利]一种脂肪组织的冻存方法

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了一种脂肪组织的冻存方法,包括脂肪组织冻存保护液的配置、脂肪抽吸物的处理、脂肪组织冻存，将含有脂肪组织的冻存管于4℃平衡后，按照预控制的冷冻曲线进行冷冻，最后于‑196℃条件下的液氮罐中长期储存。本发明根据脂肪组织的特性和应用特点，主要通过脂肪组织冻存过程中，减少热应力对脂肪组织的损害、控制冷冻速率以及优选冷冻保护剂等方面，进一步提高冻存脂肪组织活性；本发明提供的冻存脂肪组织的方法，保存效果稳定，并可有效提升复融后脂肪组织的活性，移植效果较为理想。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种脂肪组织的冻存方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：

自2001年科尔曼博士发表了首份自体脂肪移植的报告后，自体脂肪移植术在整形美容外科领域中已被广泛运用。目前自体脂肪移植主要可应用于面部和手部等部位年轻化、疤痕修复、乳房再造、增大以及其它部位大面积的改造等。除此之外，脂肪还可成为组织工程与再生医学方面完美的应用材料来源，例如糖尿病患者、类风湿关节炎、老年人或其他有慢性伤口和溃疡病的人群，可从该技术得到受益。到目前为止，自体脂肪移植后，影响软组织增强效果的主要障碍是移植后不可预估的长期效应，其主要原因是移植部位的吸收率过高所带来(高达原始移植体积的70％)。这种高吸收通常需要在矫正区域进行过度矫正或重复的脂肪移植操作，这样会引起病人不适，移植部位外观不理想，感染风险增加，并且还有随之而来的高昂医疗费用等问题。

目前脂肪抽吸物主要用于在抽脂术进行过程中的即刻自体脂肪填充，因此填充后剩余的脂肪抽吸物通常被丢弃。如果有更有效的脂肪储存手段，对医生和患者而言，更具有实际应用意义。例如将收集的脂肪抽吸物根据后期患者移植的需求，将脂肪组织分成不同体积进行冻存，这么做的益处是不仅降低患者经济成本，而且减少患者的不适、并发症等风险。除此之外，年轻的细胞、组织更健康、耐寒、活力更高，医生可选择性的收集脂肪组织冻存，随着患者年纪的增长，一方面作为未来身体各部位软组织填充或增强方面的应用材料；另一方面还可作为获取脂肪间充质干细胞的主要来源，以备基于细胞疗法的各种疾病的临床应用。

现代的冷冻保存技术允许长期储存各类活细胞以及某些组织，归纳组织冻存的主要程序如下：(1)冻存前根据组织的特性向组织中加入适合的冷冻保护剂；(2)以可控的速率将组织冷却至低温；(3)细胞长期储存至深冻环境。其中影响组织冻存的核心环节是冷冻保护剂的选择以及合理的温度控制。由于冷冻对于大多数生物体是致命的，冷冻可形成胞内胞外冰晶，导致细胞机械性损伤和渗透性损伤。因此为了提高脂肪组织后期的移植成活率、保证移植效果以及后期复融脂肪组织后的脂肪间充质干细胞得率和活率，脂肪组织的冻存环节需要进一步改良和控制。

2016年11月，陈海佳等人申请了相关专利(中国专利申请号：CN201611082588.5、CN201611087952.7)，专利主要对脂肪组织的冻存保护液进行创新，进一步降低冻存液对脂肪组织的毒副作用，提升复融后脂肪组织获取脂肪间充质干细胞的得率和活率。但在组织冻存过程中其他可能影响到组织复融活性的因素，因脂肪组织冻存和临床应用技术多在于科学研究中，还未进行大规模的商业化用途，因此目前涉及到全方面解决脂肪组织冻存复融后临床应用的规范化、标准化方法较少见，亦无国内专利涉及。因此本发明主要针对脂肪组织的各冷冻保存核心环节，提出可提高冻存脂肪组织活性的一种方法。

综上所述，现有技术存在的问题是：

(1)在组织冻存过程中除了冻存保护液的因素外，还有其他可能影响到组织复融活性的因素，会造成脂肪以及脂肪间充质干细胞的得率和活率较低。

(2)目前常用的冻存保护液含有胎牛血清、培养基等成分，胎牛血清有免疫原性及病毒污染风险的可能，常用商用培养基中的不确定成分也可能带来一定的免疫原性，这些都会导致后期临床应用人体的不良反应。