[发明专利]一种测定人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种测定人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光试剂盒的制备方法，试剂盒包括：甘胆酸R1试剂、R2试剂、磁分离试剂、校准品液系列和化学发光底物液；甘胆酸R1试剂是异硫氰酸荧光素标记的抗甘胆酸‑BSA鼠单克隆抗体稀释液，甘胆酸R2试剂是碱性磷酸酶标记的甘胆酸抗原稀释液，磁分离试剂为抗异硫氰酸荧光素鼠单克隆抗体包被的磁微粒稀释液，甘胆酸校准品液是由合成的甘胆酸和缓冲液组成，发光底物液是碱性磷酸酶催化的含二氧杂环乙烷的Tris‑HCl缓冲液。本发明极大地提高了免疫反应的信号强度和灵敏度，使低含量物质在进行免疫结合时也能产生很强的化学发光信号，为甘胆酸的检测提供了一种更准确、精确、方便、快捷和简单的方法。

技术领域

本发明涉及医用诊断试剂领域，特别是涉及一种采用磁微粒化学发光技术和抗原-抗体结合技术检测人体甘胆酸含量的磁微粒化学发光检测试剂盒。

背景技术

甘胆酸的分子量为466.3，是胆汁酸的主要成分之一，甘氨酸的羧基与胆酸侧链末端的羟基通过肽键结合后即可形成甘胆酸。甘胆酸是一种初级胆汁酸，它是胆固醇在肝细胞内经过复杂的酶促反应后转变而成的。

甘胆酸主要由肝细胞合成，经毛细胆管、胆管排入胆囊，然后随同胆汁进入十二指肠，促进脂肪的消化与吸收。大部分甘胆酸在回肠和结肠末端被重吸收，经门静脉再回肝脏，由肝细胞摄取再利用。重吸收的甘胆酸又进入肝-肠循环，机体即是通过这种循环机制充分地利用甘胆酸。甘胆酸在血清中主要以结合蛋白的形式存在，外周血中胆酸在正常情况下含量甚微。正常成人无论空腹或餐后,其血清中的甘胆酸都稳定在一个较低的水平。

当肝细胞受损或胆汁郁滞时，肝脏对甘胆酸的摄取和排泄会发生异常，从而引发甘胆酸代谢和循环紊乱，导致血液中的甘胆酸含量升高。此外，甘胆酸浓度的高低与肝细胞损害程度即胆汁酸代谢障碍程度直接相关。

近年来有大量的研究报道表明，甘胆酸在肝胆疾病诊断中具有非常重要的临床意义。肝细胞一旦病变即可引起血液中甘胆酸浓度升高。甘胆酸在患有肝胆疾病的患者中阳性率颇高，例如在：急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝癌、胆石症，黄疸，胆管、胆囊排泄功能障碍，梗阻性肝病，肠-肝循环障碍等疾病患者体内的水平均会显著升高，并且通常具有出现早、恢复慢的特点。甘胆酸是妊娠晚期血清中最主要的胆汁酸组分。正常妊娠时孕妇血清CG水平随孕周逐步增高，至足月妊娠CG值较非孕时增加30％-60％。随着妊娠月份的增加，由于血中孕酮水平的增高，降低了平滑肌的张力，导致妊娠期间胆囊张力降低和排空抑制，使肝脏对胆汁的摄取及排泄发生障碍，引起胆汁不同程度的淤积。因此，部分妊娠妇女血清CG值可出现生理性增高，但临床上并没有明显的ICP症状。随着CG值的升高程度不同，对母婴有着不同程度的损伤，且CG值越高危害越大。大量研究显示，孕妇血清CG水平由于妊娠期胎盘合成和分泌大量雌激素和孕激素以及代谢负荷增大，可能诱发肝胆系统的变化，使孕妇易患妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)。ICP患者血清CG水平较正常孕妇显著增高，甚至可达10-100倍，随ICP患者血清CG增高使羊水污染率、早产率、胎儿宫内窘迫率及剖宫产率增高，甘胆酸增高10倍以上，这些危险进一步增加。当孕妇有ICP时，肝小叶中央区和毛细血管内有胆汁淤积及胆栓存在、胆汁排泄障碍导致胆酸在外周循环中的堆积，致使血中CG含量增高，并产生皮肤瘙痒等症状。由于孕妇血液及羊水中胆汁酸均升高，使胎盘绒毛静脉腔内外均处于高浓度胆汁酸刺激之中，引起血管收缩，胎盘绒毛表面血管痉挛，氧合血流量减少，导致胎儿缺氧，可出现各种并发症，如胎儿宫内窘迫、早产等。国内报道，早产率为13％-42.4％，胎儿宫内窘迫发生率为44％-60.6％。因此，甘胆酸可作为肝胆疾病诊断的良好指标。

目前已知的甘胆酸检测方法主要有RIA(radioimmunoassay放射免疫测定法)法、均相酶免疫检测法、酶联免疫法(ELISA)、高效液相色谱法、气相色谱法和气相色谱和质谱联用法(GC-MS)。但是，这些方法都存在一定的缺陷，RIA法污染大、ELISA法自动化程度低且操作复杂繁琐，高效液相色谱法、气相色谱法和气相色谱和质谱联用法不适合广泛用于临床检测。