[发明专利]一种快速定量检测cTnI的微流控荧光免疫芯片

说明书

本发明涉及快速定量检测cTnI的微流控荧光免疫芯片，可有效解决灵敏度低、重复性差、易受外界环境干扰，以及现有配套仪器昂贵、检测时间长的问题。底板为空心凹槽长方形，顶板置于底板凹槽的正上方，构成底板和顶板的密封结构，顶板的上平面有样品加样口和负压接口，底板的凹槽内经回形管装有串接在一起的样品加样区、血细胞过滤区、微栅反应腔、时间阀、识别反应区和废液池，血细胞过滤区上装有血细胞滤膜，样品加样口正对底板样品凹槽内的样品加样区，回形管的负压端接负压接口，微栅反应腔预封装有cTnI检测抗体和质控抗体，识别反应区预封装cTnI捕获抗体和质控抗体；本发明结构简单易生产制备，使用方便，准确率高，节能环保，经济和社会效益显著。

技术领域

本发明涉及医疗诊断设备，特别是一种快速定量检测cTnI的微流控荧光免疫芯片。

背景技术

当前，心血管疾病，特别是心肌梗死（Acute myocardial infarction，AMI）在世界范围内已成为成年人最大的潜在杀手，仅在美国就有超过7000万人患有心脏病，每年大约有600万人因胸痛而进急诊室，每年急性心肌梗死的死亡人数超过了50万。我国心血管病患病率呈“井喷式”上升，目前，患者超过两亿人，高居成年人致死疾病榜单首位，几乎每10秒钟就有一名中国人死于心血管病。通过临床数据统计，心血管病的死亡率在人口死亡中占40％，已高于欧美国家，属心血管疾病高发病率国家。对于心血管疾病，如果能做到早预防、早发现及早救治，就能最大限度的防止致残、致死后果，最大限度的改善心血管患者的预后和生活质量。

目前急性心肌梗死(AMI)检测和诊断的生化指标主要有：肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)等。过去传统的实验室检测多为心肌酶谱系列，特别是肌酸激酶同工酶（CK-MB），曾一度被认为是心肌梗死诊断的“金标准”。然而近年来研究发现，它对急性心肌梗死的诊断存在着不足之处，特异性较差，许多疾病都可导致它们的升高；且在血液中酶活性升高出现较晚、维持时间较短等缺点。cTnT与骨骼肌肌钙蛋白T(sTnT)同源性很高，容易发生交叉反应。而cTnI具有特异性高、出现时间早、敏感性高和在血液中持续时间长等优点，可作为AMI早期诊断指标，已经被证实为心肌损伤最特异、最敏感的血清标志物之一。

目前市场上测定血清/血浆/全血中的cTnI方法，多用酶联免疫吸附法、放射免疫分析法、化学发光法、荧光免疫法及胶体金免疫层析法等。但酶联免疫检测法操作复杂，检测耗时长；放射免疫分析法，具有核素污染；化学发光法对专业技术要求高，虽具有准确、灵敏度高、特异性强等优点，但其所用仪器价格昂贵，不能快速提供检查结果。胶体金免疫层析法具有操作简便、检测快速，标本用量少，价格便宜的优势，但是当待测物质含量较低，通过肉眼来判断容易出现误判，灵敏度较低。荧光免疫层析法荧光免疫层析法大多数采用荧光素或其他物质CN 106248927 A作为发光源，虽然有较高的线性范围，但受背景信号的干扰，不能够保证低端灵敏度。专利CN 101819208 A公开了一种测定血清中脑钠肽的试剂盒，该试剂盒采用了纳米微球免疫比浊法，通过加入纳米微球标记抗体等不同试剂，形成不溶性的抗原-抗体的复合物，产生浊度，从而实现了脑钠肽的高灵敏检测。中国专利CN101432626A公布了一种肌钙蛋白高灵敏分析系统，该发明主要基于微量滴定板进行分析，灵敏度高，但操作复杂、反应时间长、检测范围窄，对样品中cTnI的检测上限仅为50pg/mL。中国专利申请号201010619731.6 公开了一种定量检测肌钙蛋白I的免疫层析试纸条，该专利采用荧光微粒标记心肌肌钙蛋白I单克隆抗体，结合免疫层析技术，实现对肌钙蛋白I的定量检测。该专利所采用荧光物质为荧光素，属于有机荧光染料，但是容易受到血液中基质荧光影响。中国专利CN 102539784 A提供了一种检测心肌肌钙蛋白I的方法及运用该方法制备的心肌肌钙蛋白I 检测试剂盒。该方法将抗体组合物与聚苯乙烯胶乳颗粒进行偶联，然后与检测标本中相应抗原发生免疫反应形成聚集颗粒，在400～700nm波长下测定反应物产生的浊度，即可得出检测标本中cTnI的含量。