[发明专利]一种快速定量检测MYO的微流控荧光免疫芯片

权利要求书

1.一种快速定量检测MYO的微流控荧光免疫芯片，包括底板、顶板、样品加样区、微栅反应腔、识别反应区、废液室和血细胞过滤区，其特征在于，所述的底板（1）为空心凹槽长方形，顶板（2）置于底板凹槽的正上方，构成底板和顶板的密封结构，顶板的上平面有样品加样口（11）和负压接口（9），底板的凹槽内经回形管（10）装有串接在一起的样品加样区（3）、血细胞过滤区（12）、微栅反应腔（5）、时间阀（6）、识别反应区（7）和废液池（8），血细胞过滤区（12）上装有血细胞滤膜（4），样品加样口（11）正对底板样品凹槽内的样品加样区（3），回形管（10）的负压端接负压接口（9），微栅反应腔（5）预封装荧光标记的抗MYO单克隆抗体混合样品，构成样品与荧光标记的BNP单克隆抗体混合反应区；识别反应区（7）包被抗MYO的单克隆抗体；样品加样区（3）中的样品靠自虹吸作用移动或采用负压接口连接控制泵进行移动；

所述的MYO单克隆抗体的制备方法是：

1）、荧光微球的活化、洗涤，此步骤需要将荧光微球表面修饰基团活化，取直径为200nm荧光微球，加入缓冲液离心，弃上清，沉淀用洗涤缓冲液重复洗涤3次；将末次沉淀重悬于所述洗涤缓冲液中，使荧光微球的质量体积比终浓度为1%，所述洗涤缓冲液选自PBS缓冲液和MES缓冲液中的一种：

2）、MYO抗体包被荧光微球，取1 ml活化洗涤后的200 nm胶乳溶液，加入抗MYO抗体，使抗MYO抗体终浓度为1 mg/ml ；混匀后，置4度，摇床以220rpm转速包被8h；用PBS缓冲液洗涤未与荧光微球结合的抗MYO抗体，重复3次；封闭：将洗涤后的抗MYO抗体的荧光微球溶于包含所述保护剂的缓冲液中，使所述荧光微球的质量体积比终浓度为0.1-0.14%；

3）、抗MYO抗体和荧光微球结合后封闭，将所述荧光微球与所述抗MYO抗体混合物，加入BSA0.3%，室温下反应2h，离心，除去其中少量的沉淀物；清洗，将形成的荧光微球-抗MYO抗体复合物溶液离心，弃上清，加入磷酸盐缓冲液重复清洗3次；将末次沉淀溶于含所述保护剂和防腐剂的缓冲液中，使所述荧光微球的质量体积比终浓度为0.04%-0.14%。

2.根据权利要求1所述的快速定量检测MYO的微流控荧光免疫芯片，其特征在于，所述荧光标记抗体为荧光微球标记抗体，所述荧光微球载体为天然或合成的有机高分子材料，负载的荧光物质有机物，其激发波长为620-680 nm，发射波长为730-790 nm，粒径为100-500 nm。

3.根据权利要求1所述的快速定量检测MYO的微流控荧光免疫芯片，其特征在于，所述的顶板上开有排气孔。

4.根据权利要求1所述的快速定量检测MYO的微流控荧光免疫芯片，其特征在于，所述的样品加样区上开有圆形或方形的加样孔（11）。

5.根据权利要求1所述的快速定量检测MYO的微流控荧光免疫芯片，其特征在于，所述底板为长方形的凹槽状，具有不同功能微结构，底板和顶板采用胶粘、机械固定、超声封合密封固定在一起。

6.根据权利要求1所述的快速定量检测MYO的微流控荧光免疫芯片，其特征在于，所述微栅反应腔，包括有等间距排列的微结构，所述微结构为梯形、三角形、半圆形的一种。

7.根据权利要求1所述的快速定量检测MYO的微流控荧光免疫芯片，其特征在于，所述时间阀包括阻滞栏结构形成的导流槽，每个阻滞栏呈下宽上窄的梯形、阶梯形或三角形。

8.根据权利要求1所述的快速定量检测MYO的微流控荧光免疫芯片，其特征在于，所述识别反应区，包括有等间距排列的微结构，所述微结构为梯形、三角形、半圆形。