[发明专利]一种快速定量检测CK-MB的微流控荧光免疫芯片

说明书

本发明涉及快速定量检测CK‑MB的微流控荧光免疫芯片，可有效解决现有CK‑MB检测芯片灵敏度低、重复性差、易受外界环境干扰，以及现有配套仪器昂贵、检测时间长的问题。底板为空心凹槽长方形，顶板置于底板凹槽的正上方，构成底板和顶板的密封结构，顶板的上平面有样品加样口和负压接口，底板的凹槽内经回形管装有串接在一起的样品加样区、血细胞过滤区、微栅反应腔、时间阀、识别反应区和废液池，血细胞过滤区上装有血细胞滤膜，样品加样口正对底板样品凹槽内的样品加样区，回形管的负压端接负压接口，微栅反应腔预封装荧光标记的抗CK‑MB单克隆抗体混合样品，识别反应区包被抗CK‑MB的单克隆抗体；本发明易生产制备，使用方便，准确率高，节能环保，成本低廉。

技术领域

本发明涉及医疗诊断设备，特别是一种快速定量检测CK-MB的微流控荧光免疫芯片。

背景技术

肌酸激酶(以下简称为CK) 是由两种不同亚基(M和B)组成的二聚体，主要与细胞的能量代谢相关。正常人体组织主要含3种同工酶，即CK-MM、CK-BB、CK-MB。CK-MM主要存在于肌肉细胞中，CK-BB主要存在于脑细胞中，CK-MB主要存在于心肌细胞中。CK-MB是目前常用的心肌损伤标志物，曾一度被视为诊断心肌梗死的“金标准”。

CK-MB在急性心肌梗死发病后4～8小时内增高，24小时达峰值，两三天其浓度恢复正常。CK-MB因其具有重要的生理功能和临床指导意义，已引起人们广泛的重视和深入的研究。

目前市场上多用酶联免疫吸附法、化学发光法、胶乳增强免疫比浊法、荧光免疫法及胶体金免疫层析法等测定血清中的CK-MB。但酶联免疫检测法操作复杂，检测耗时长；化学发光法对专业技术要求高，不易在临床实验室中进行常规开展。胶体金免疫层析法具有操作简便、检测快速，标本用量少，价格便宜的优势，但是当待测物质含量较低，通过肉眼来判断容易出现误判，灵敏度较低。荧光免疫层析法荧光免疫层析法大多数采用荧光素或其他物质CN 106248927 A作为发光源，虽然有较高的线性范围，但受背景信号的干扰，不能够保证低端灵敏度。中国专利200610114997 .9公布了一种血清中肌酸激酶同工酶的化学发光测定方法，其主要利用肌酸激酶催化磷酸肌酸与二磷酸腺苷反应生成三磷酸腺苷和肌酸，再用甘油激酶催化三磷酸腺苷和甘油生成3-磷酸甘油，3-磷酸甘油被磷酸甘油氧化酶氧化并产生过氧化氢，再经过氧化物酶作用，过氧化氢使鲁米诺氧化而发光。中国专利200520041211 .6披露了一种心血管疾病诊断和预测多指标蛋白芯片检测试剂盒，该试剂盒采用化学发光法(如辣根过氧化氢酶和鲁米诺)检测，并能同时检测C反应蛋白、肌红蛋白、心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶等八种抗体。虽然化学发光法灵敏度较高，但重复性和稳定性均较差，且配套仪器昂贵，不能单样品快速即时检测，大大限制了化学发光法的广泛应用。中国专利CN 106248927 A公布了一种肌酸激酶同工酶荧光免疫层析法，主要采用了时间分辨荧光微球作为荧光标记物，对肌酸激酶同工酶进行检测及信号的读取，定量检测全血、血清或血浆中的CK-MB含量。该试纸条具有方便快捷、操作简单，但是大多数都采用将时间分辨荧光微球固定在结合物释放垫上，由于微球的释放不均一，导致重复性和稳定性较差。