[发明专利]用于C5aR1基因敲除的sgRNA、载体以及构建方法和检测方法有效
| 申请号： | 201811358306.9 | 申请日： | 2018-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN109439662B | 公开（公告）日： | 2020-09-01 |
| 发明（设计）人： | 张静;徐昕晔;路明 | 申请（专利权）人： | 北京大学第三医院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/85;C12N15/90;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 赖俊科 |
| 地址： | 100000 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 c5ar1 基因 sgrna 载体 以及 构建 方法 检测 | ||
【权利要求书】：
1.用于C5aR1基因敲除的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
2.一种构建C5aR1基因敲除小鼠的方法，其特征在于，如SEQ ID NO.1所示的sgRNA和如SEQ ID NO.2所示的sgRNA分别连入表达载体上进行体外转录，得到用于显微注射的sgRNA；
所述表达载体为携带T7启动子质粒的载体。
3.用于检测权利要求2所述的构建C5aR1基因敲除小鼠的方法得到的C5aR1基因敲除小鼠的引物序列，其特征在于，所述引物序列如SEQ ID NO.5-7所示。
4.一种检测权利要求2所述的构建C5aR1基因敲除小鼠的方法得到的C5aR1基因敲除小鼠的试剂盒，其特征在于，含有权利要求3所述的引物序列。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液、双蒸水中的任一种或几种。
6.一种检测权利要求3所述的构建C5aR1基因敲除小鼠的方法得到的C5aR1基因敲除小鼠的方法，其特征在于，权利要求3中的引物序列以待检测物的基因组作为模板，进行PCR扩增，得到的产物测序，判断所述待检测物的检测位点的基因型；所述待检测物为鼠尾基因组；PCR扩增体系为20-25μL；PCR扩增的退火温度为62℃。
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