[发明专利]一种嗜铬蛋白A检测试剂及检测参考区间及检测方法

说明书

本发明公开了一种嗜铬蛋白A检测试剂，包括：免疫复合体，抗体检测体系；所述免疫复合体由标记后的第一特定抗体，标记后的第二特定抗体，嗜铬蛋白A校准品，嗜铬蛋白A质控品，待测样本复合形成；第一特定抗体，第二特定抗体由抗体与人嗜铬蛋白A氨基酸序列中氨基酸位点进行表位特异性结合形成；氨基酸位点包括：第1‑113位，第131‑143位，第337‑364位，第373‑439位；检测试剂能够定量检测人体血浆中嗜铬蛋白A的浓度，临床上主要用于嗜铬细胞瘤和神经内分泌肿瘤辅助诊断和鉴别诊断；本发明的参考区间与临川诊断符合度高，提高辅助诊断的准确性；本发明再利用全自动磁珠化学发光平台开发出的检测方法，缩短了检测周期。

技术领域

本发明属于试剂诊断研究领域，特别是一种嗜铬蛋白A检测试剂及检测参考区间及检测方法。

背景技术

嗜铬蛋白A或嗜铬粒蛋白A(ChromograninA，CGA)属嗜铬蛋白家族，嗜铬蛋白存在于所有神经内分泌细胞内能分泌儿茶酚胺或其他内分泌激素的分泌囊泡中，富含酸性氨基酸，为酸性可溶性蛋白质，最初从牛肾上腺髓质颗粒中提取，后发现广泛存在于神经系统和APUD(amine precursor uptake and decarboxylation)系统中。cDNA序列分析和生化研究表明CGA由439个氨基酸残基组成，分子量为48KD，等电点为4.8，具有抗热变形的特点。

CGA作为前体肽，在不同的组织中可分解为不同片段，参与保持机体内环境的稳定，诸如：调节能量代谢、细胞内外钙平衡；抑制儿茶酚胺的释放；抑制机体炎症反应；参与组织修复、疼痛缓解及保持胃肠道动力；并构成了天然免疫的第一道防线防卫外来微生物(包括细菌、真菌、酵母菌等)的侵袭；抑制肿瘤细胞生长及多瘤生长模式、增加肿瘤细胞凋亡；抑制成纤维细胞黏附、聚集等。

神经内分泌肿瘤(neuroendocrine neoplasm,NEN)起源于弥散性神经内分泌系统具有胺前体摄取和脱羧基功能的神经内分泌细胞，是一组异质性显著的肿瘤,具有从缓慢生长、惰性、低度恶性、显著恶性、高侵袭性和转移性的一系列生物学行为，部分NEN具有家族遗传性倾向。NEN以往相对少见,过去15年间,NEN的年发病率从2.48/100000上升至5.86/100000,呈逐年增加趋势,这可能与诊断技术进步,确诊率增加有关。NEN可发生于人体多个器官和组织,包括胃肠道、胰腺、肝脏、胆囊、胆管、支气管、肺、甲状腺、甲状旁腺、肾上腺髓质、副神经节以及其他部位的神经内分泌细胞,其中胃肠胰神经内分泌肿瘤最为常见,约占所有NEN的55％-70％。

1997年Angelsen等报道，含有CGA肿瘤细胞的患者具有较高的血清CGA水平，CGA不仅在肿瘤原发灶释放，而且能在转移瘤中释放，对评估转移是可靠的指标。2000年Tomassetti等研究80例神经内分泌肿瘤患者，其中类癌34例，胰腺癌29例，MEN-I 17例。检测发现肿瘤患者血CGA浓度升高，说明血清CGA为预测肿瘤神经内分泌分化程度的有用的标记物。进一步证实检测患者血液CGA的浓度的可靠性及准确性。Giampaolo等研究CGA分泌规律，发现健康人群中体位变化不影响CGA水平，而可引起儿茶酚胺轻度升高。低血糖状态下补充糖元可提高肾上腺素水平，但对去甲肾上腺素、CGA水平无影响。提示测定CGA对体位或是否进食没有限制。Canale等研究血液CGA在嗜铬细胞瘤合并肾功能不全患者中诊断的应用，发现在肌酐清除率小于1.33ml/s(80ml/min)的患者中，CGA诊断敏感度、特异性、准确性、阳性预测值及阴性预测值均有下降。故在评估患者血液CGA水平时应了解其肾功能情况，排除假阳性。

CGA广泛存在于神经内分泌细胞中,其血浆水平升高提示存在神经内分泌细胞来源的肿瘤。肿瘤的类型纷繁复杂，例如，上皮细胞分化的实性胰腺肿瘤可分为胰母细胞瘤、腺泡细胞癌、内分泌肿瘤和实性假乳头肿瘤，上皮性肺肿瘤可分为腺癌、鳞状细胞癌、神经内分泌肿瘤、大细胞癌、腺鳞癌、巨细胞癌等，甲状腺癌可分为乳头状癌、滤泡状癌、未分化癌和髓样癌等，通过血液CGA水平的评估，可对神经内分泌细胞来源的肿瘤进行鉴别诊断。