[发明专利]一种L-氨基酸氧化酶的突变体有效
| 申请号： | 201811350819.5 | 申请日： | 2018-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN109321541B | 公开（公告）日： | 2020-12-01 |
| 发明（设计）人： | 吴静;裴杉杉;刘佳;陈修来;罗秋玲;张权 | 申请（专利权）人： | 江南大学;无锡宸明生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/06 | 分类号： | C12N9/06;C12N15/53;C12N15/10;C12N15/70;C12N1/21;C12P7/40;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 氨基酸 氧化酶 突变体 | ||
1.一种L-氨基酸氧化酶的突变体，其特征在于，所述L-氨基酸氧化酶的突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.编码权利要求1所述L-氨基酸氧化酶的突变体的基因。
3.含有权利要求2所述基因的载体。
4.一种构建权利要求1所述的L-氨基酸氧化酶的突变体的方法，其特征在于，
(1)克隆谷氨酸棒杆菌来源的L-氨基酸氧化酶编码基因；
(2)连接(1)中得到的谷氨酸棒杆菌L-氨基酸氧化酶编码基因和pET系列载体，得到携带谷氨酸棒杆菌来源的L-氨基酸氧化酶基因的pET系列载体；
(3)以(2)中的连接产物为模板，设计定点突变的引物，进行定点突变PCR，得到突变质粒Q183A-pET系列载体，将突变后的质粒转化到大肠杆菌中表达。
5.一种提高L-氨基酸氧化酶对L-缬氨酸的催化效率的方法，其特征在于，所述方法是将谷氨酸棒杆菌(Corgnebacterium glutamicum)来源的L-氨基酸氧化酶的第183位的氨基酸谷氨酰胺Gln突变成丙氨酸Ala；突变之后的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
6.一种基因工程菌，其特征在于，表达权利要求1所述的L-氨基酸氧化酶的突变体。
7.一种提高α-酮异戊酸产量的方法，其特征在于，利用权利要求6所述的基因工程菌作为全细胞催化剂，转化含L-缬氨酸的底物得到α-酮异戊酸。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，将含有终浓度为25-35g/L的全细胞、终浓度为60-70g/L的L-缬氨酸的转化体系，置于20-37℃条件下，反应20-24h。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，培养权利要求6所述基因工程菌，收集培养液，离心，获得菌体。
10.权利要求1所述的突变体或权利要求6所述的重组菌在食品、医药、化工领域的应用。
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