[发明专利]一种检测鱼糜制品中谷氨酰胺转氨酶的方法

说明书

本发明涉及食品添加剂的检测方法，具体是指一种检测鱼糜制品中谷氨酰胺转氨酶的方法，包括谷氨酰胺转氨酶食品添加剂的分离纯化、谷氨酰胺转氨酶浓度的测定、Western‑blotting灵敏度的检测分析、采取建立的Western‑blotting法检测市售鱼糜制品等四个步骤，操作的过程易控制且检测结果准备，适用于大多数鱼糜制品。

技术领域

本发明涉及食品添加剂的检测方法，特别涉及一种检测鱼糜制品中谷氨酰胺转氨酶的方法。

背景技术

谷氨酰胺转胺酶具有催化蛋白质分子内和分子间的交联、蛋白质和氨基酸之间的连接以及蛋白质分子内谷氨酰胺基水解的功能，被广泛应用于食品、医药及纺织等领域。蛋白质是维持肉制品组织特性的主要因素，蛋白质分子交联凝结使食品具有机械性能。蛋白质分子的交联作用赋予食品许多特性，包括粘性、可溶性、乳化性以及胶凝特性。转谷氨酰胺酶由于能够使蛋白质发生交联作用而备受关注，它催化伯胺与谷酰胺残基肽键上的羧氨基，发生酰基转移反应。本发明提出的检测方法，能够有效检测出市售鱼糜制品中谷氨酰胺转氨酶含量。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种检测鱼糜制品中谷氨酰胺转氨酶的方法，其操作简单、结果准确。

为了达到上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种检测鱼糜制品中谷氨酰胺转氨酶的方法，包括如下步骤：

(1)谷氨酰胺转氨酶(MTGase)食品添加剂的分离纯化：利用双水相萃取的方法，称量6g谷氨酰胺转氨酶(MTGase)食品添加剂，溶于400mL的20mmol/L的Tris-Hcl中，与聚乙二醇6000/(NH4)2SO4萃取液按照1：5的比例混合，静置2h后，取下层液相；

(2)谷氨酰胺转氨酶(MTGase)浓度的测定：利用Bio-Rad试剂盒的方法测定蛋白浓度，根据不同的浓度的BSA在595nm处的吸光值建立标准曲线，计算TGase的浓度；

(3)Western-blotting灵敏度的检测分析：以1/50mg/mL MTGase为起始浓度，采用2倍稀释法，逐级稀释至1/800mg/mL，在抗MTGase的抗体以1：10000的比例稀释下，上样10μL，确定Western-blotting的最低检测限；

(4)采取建立的Western-blotting法检测市售鱼糜制品：用20mmol/L Tris-Hcl缓冲液对鱼糜制品进行MTGase提取及蛋白浓度的测定；以纯化的MTGase为半定量的对照，进行SDS-PAGE分析，由此检测鱼浆中添加的MTGase。

作为优选的，所述的Tris-Hcl缓冲液为含8moL/L尿素、0。1mmol/L DTT、pH＝8。0的Tris-Hcl缓冲液。

作为优选的，在步骤(4)蛋白浓度的测定中，Tris-Hcl缓冲液浓度太大时需进行适当的稀释。

附图说明

图1为本发明MTGase提取液的SDS-PAGE的电泳图谱；

其中，M、标准分子量蛋白；1、市售谷氨酰胺转氨酶食品添加剂，2、纯化的MTGase。

图2为MTGase提取液的免疫印迹分析。

图3为牛血清白蛋白浓度标准曲线。

图4为方法灵敏度的分析图；

其中，各泳道MTGase浓度分别为：1、1/50mg/mL，2、1/100mg/mL，3、1/200mg/mL，4、1/400mg/mL，5、1/800mg/mL。

图5为市售鱼浆中MTGase的检测结果；

其中，C、纯化的MTGase，1、杂鱼鱼浆，2、金线鱼鱼浆，3、淡水鱼鱼浆。