[发明专利]抑制RTL1基因表达的siRNA及其应用

说明书

本发明提供了抑制RTL1基因表达的siRNA及其应用，所述siRNA为以下三条siRNA中的至少一种：RTL1‑siRNA1，其正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；RTL1‑siRNA2，其正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，其反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；RTL1‑siRNA3，其正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，其反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述siRNA干扰小鼠RTL1基因，转录水平上的干扰效率达到87％；该siRNA可应用于制备预防和/或治疗肌肉肥大症产品。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及抑制RTL1基因表达的siRNA及其应用。

背景技术

RTL1基因(反转录转座子1基因，retrotransposon-like-1)，又名父本表达基因11(paternally expressed gene 11,Peg11),在人和小鼠中为父本表达的印记基因，没有内含子序列。RTL1基因在胚胎和胎盘组织中表达量很高，对母体胎盘与胎儿的营养传递起着重要作用，敲除该基因的小鼠表现为胎儿死亡率升高、新生儿生长停滞、胎盘尺寸偏小；与人的胎儿发育和新生儿的生长也有密切关系。该基因位于DLK1-DIO3印记区域，此区域基因对肌肉发育有一定的影响，在转基因小鼠中异位表达RTL1基因，会导致肌肉肥大；此外，该基因与callipyge绵羊的肌肉肥大相关，双肌臀的绵羊中RTL1基因的表达量是正常绵羊中的12倍。

C2C12细胞是由小鼠骨骼肌卫星细胞永生化而来的细胞株，保持着一定的增殖和分化能力，且细胞形态和特性均一，可无限代培养，体外培养的C2C12成肌细胞能在低血清诱导条件下分化为多核的肌管，并表达Myogenin和Myosin等成熟骨骼肌的各种标志蛋白，因此C2C12细胞通常成为体外研究成肌细胞增殖和分化能力的首选模型。

RNA干扰是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象。该技术主要是采用与靶基因同源的20-15nt的siRNA(Small interfering RNA,siRNA),诱导靶基因mRNA特异性的降解，从而抑制基因的表达。由于其干扰效率高、操作简便，常被用于基因功能的研究。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了抑制RTL1基因表达的siRNA及其应用，该siRNA干扰小鼠RTL1基因，转录水平上的干扰效率能达到87％，干扰效率高、特异性好、操作简便、成本低廉，为研究RTL1基因的功能奠定了基础；本发明人发现RTL1基因能够显著抑制成肌细胞的增殖和分化，因而一方面，抑制RTL1基因表达的siRNA能为研究肌肉发育的表达调控机制提供新思路，另一方面，抑制RTL1基因表达的siRNA可以应用于制备预防和/或治疗肌肉肥大症产品。

为实现上述目的，本发明是这样实现的：

本发明的目的之一在于提供了一种抑制RTL1基因表达的siRNA，其为以下三条siRNA中的至少一种：

RTL1-siRNA1，其正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

RTL1-siRNA2，其正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，其反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

RTL1-siRNA3，其正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，其反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

优选地，所述siRNA为RTL1-siRNA2。

具体地，所述RTL1-siRNA1、RTL1-siRNA2、RTL1-siRNA3序列的3’端均垂悬有dTdT。

本发明的目的之二在于提供了所述的siRNA在制备预防和/或治疗肌肉肥大症产品中的应用。