[发明专利]一种利用枯草芽孢杆菌芽孢回收稀土离子的方法

权利要求书

1.一种利用枯草芽孢杆菌芽孢回收稀土离子的方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)芽孢的制备：将活化后的枯草芽孢杆菌菌株接入LB液体培养基中摇床培养3～5小时后，将种子液转接到2x SG固体培养基于36～38℃培养4～6天；

2)芽孢的收集：将步骤1)得到的芽孢收集到离心管，加入3～5℃无菌去离子水，振荡超声3～5min，然后在3～5℃下8000～12000rpm离心10～20min，去除上清液，加入18～25％质量百分含量的碘海醇溶液悬浮菌体，振荡后再转入45～60％质量百分含量的碘海醇溶液，3～5℃下8000～12000rpm离心10～20min，去除上层悬浮液，收集沉淀并用无菌水洗涤3～6次，于8000～12000rpm离心6～10min，收集得到芽孢；

3)芽孢的吸附：将步骤2)得到的芽孢与pH7.0～7.4的含有稀土离子的溶液室温孵育1～10min，于12000～15000rpm离心3～5min，去除上清液，收集吸附后的芽孢；

4)芽孢的洗脱和稀土离子的回收：将步骤3)得到的芽孢在保持pH7.0～7.4条件下加入过量2,6-吡啶二羧酸进行洗脱，于10000～14000rpm离心3～5min收集上清液，得到含稀土离子的回收液，该回收液经荧光检测，得出稀土离子含量。

2.根据权利要求1所述的利用枯草芽孢杆菌芽孢回收稀土离子的方法，其特征在于：所述稀土离子为铽或镝。

3.根据权利要求2所述的利用枯草芽孢杆菌芽孢回收稀土离子的方法，其特征在于：所述稀土元素为铽，荧光检测的吸收光谱为275nm，发散光谱为545nm。

4.根据权利要求2所述的利用枯草芽孢杆菌芽孢回收稀土离子的方法，其特征在于：所述稀土元素为镝，荧光检测的吸收光谱为275nm，发散光谱为480nm。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的利用枯草芽孢杆菌芽孢回收稀土离子的方法，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌为Bacillus subtilis 168，保藏编号为ATCC NO:27370。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的利用枯草芽孢杆菌芽孢回收稀土离子的方法，其特征在于：所述LB液体培养基的制备方法包括如下步骤：950mL去离子水中加入胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g，用1mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.0并定容至1L，高压灭菌，即得。

7.根据权利要求1至4中任一项所述的利用枯草芽孢杆菌芽孢回收稀土离子的方法，其特征在于：所述2x SG固体培养基的制备方法包括如下步骤：970mL去离子水中加入营养肉汤16g，1mol/L MgSO₄溶液2mL、2mol/L KCl溶液13mL、1mol/L MnCl₂溶液100μL、0.036mol/LFeSO₄溶液30μL、琼脂粉15g，定容至1L，高压灭菌，灭菌后加入单独灭菌的20mL 50×硝酸钙·葡萄糖溶液，即得；所述硝酸钙·葡萄糖溶液由硝酸钙四水化合物1.18g和葡萄糖5g加去离子水至100mL，即得。

8.根据权利要求1至4中任一项所述的利用枯草芽孢杆菌芽孢回收稀土离子的方法，其特征在于：枯草芽孢杆菌菌株的活化包括如下步骤：将保藏的枯草芽孢杆菌菌种划线至LB固体培养基，于36～38℃过夜培养。

9.根据权利要求1至4中任一项所述的利用枯草芽孢杆菌芽孢回收稀土离子的方法，其特征在于：所述摇床培养的条件为：36～38℃、250～300rpm。