[发明专利]一种晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法和应用

权利要求书

1.一种晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)原料前处理：晒黄烟烟叶经粉碎机粉碎至40目～120目粉末；

(2)微生物菌株的活化：将扣囊复膜孢酵母Saccharomycopsis fibuligera和食甲醇芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)VJ4-1的活性固体冻干菌粉，加入到5～10倍质量的灭菌处理的质量浓度为5～30％葡萄糖溶液中，置于35～55℃水浴锅活化30～60min，得到微生物菌株活化液，其中所述的食甲醇芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)VJ4-1保藏号为CCTCC NO：2012004，分类命名为食甲醇芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)VJ4-1，于2012年1月11日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心；

(3)固定化载体制备：将晒黄烟的烟杆、甜菜根洗净烘干，处理成碎块，高压灭菌后烘干；

(4)微生物菌株的固定化处理：称取上述步骤(3)灭菌烘干后的固定化载体碎块装入容器，按照碎块与活化液质量比为1:1～10加入已培养活化好的微生物菌株活化液，放置于4±0.5℃冷藏柜固定12～36h，过滤得到固定化微生物菌株的碎块；

(5)晒黄烟的吸附固定化发酵：将步骤(1)所得晒黄烟烟叶粉末与5～15倍质量的水混合均匀，加入步骤(4)所述固定化微生物菌株的载体碎块，载体碎块与晒黄烟烟叶粉末质量比为1:0.5～2，在温度为35～55℃，匀速搅拌，添加乳酸调节pH值为4.0～6.0，发酵1～6d，筛网过滤去除载体碎块，微孔过滤晒黄烟粉残渣，保留晒黄烟发酵液A；

(6)连续逆流超声提取：将步骤(5)所得晒黄烟粉残渣，按速率0.1～1.0kg/10min投料至浸出舱，开启主机和超声波发生器，调节温度65～100℃，料液比为质量比1:2～6，从浸出舱低端运行0.2～1h后调节出液阀门均匀放液，控制溶剂加入流量，保持浸出仓液位平衡，连续逆流超声提取达30～60min时，投料加入一定比例的醋酸铜、复合氨基酸，当连续逆流超声提取共达90～150min时，停止生产工艺，排渣，得到浸出液B；

(7)将步骤(5)的发酵液A和步骤(6)的浸出液B合并，得到晒黄烟吸附发酵提取液；

所述步骤(6)中使用的醋酸铜为分析纯，占晒黄烟粉质量0.1～1％，所述复合氨基酸为脯氨酸、缬氨酸、组氨酸的混合，均为食品级，占晒黄烟粉质量的0.5～1.5％，三者之间的质量比为1:0.5～2:0.5～2。

2.如权利要求1所述的晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法，其特征在于：还包括步骤(8)：将所述晒黄烟吸附发酵提取液经真空冷冻干燥得到晒黄烟吸附发酵提取物。

3.如权利要求1所述的晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的活性固体冻干菌粉为食品级，活性为10～30u/mg。

4.如权利要求1所述的晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的碎块为用剪刀剪成1cm长的小块，晒黄烟的烟杆和甜菜根的质量比为1:0.5～2。

5.如权利要求1所述的晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中乳酸为食品级，匀速搅拌的转速为20～80rpm。

6.一种如权利要求1所述方法制备的晒黄烟吸附发酵提取液在卷烟配方烟丝加料中的应用，将晒黄烟吸附发酵提取液按与烟丝0.01％的质量比和糖分、水混匀，喷洒到制丝加料罐中。

7.一种如权利要求2所述方法制备的方法制备的晒黄烟吸附发酵提取物在加热不燃烧卷烟烟丝中加香的应用，将该晒黄烟提取物溶解到70％乙醇溶液中，稀释1000倍，按与烟丝0.02％的质量比加香。

8.一种如权利要求1所述方法制备的晒黄烟吸附发酵提取液在加热不燃烧卷烟再造烟叶中的应用，将该提取液按0.015％再造烟叶原料的质量比，添加到加热不燃烧卷烟再造烟叶涂布液中。