[发明专利]一种具有肌肉细胞修复功能的干细胞活性因子组合物的制备方法

说明书

本发明涉及医用、保健产品技术领域，特别涉及一种具有肌肉细胞修复功能的干细胞活性因子组合物的制备方法，首先获取自体或异体具有活跃再生能力的人体肌肉干细胞，通过体外培养大量扩增，建立长期应用的细胞系。通过在低温条件下超声波破碎细胞，离心后收集上清，过滤以及浓缩得到肌肉干细胞提取物，合并以干细胞培养液的提取物，加以活性稳定剂、防腐剂，再混合以渗透剂，得到活性因子组合物。本发明的有益效果是：干细胞活性因子组合物能够对受损肌肉与皮肤进行很好的修复和再生长作用；可以促进皮肤衰老状态的改善。

技术领域

本发明涉及医用、保健产品技术领域，特别涉及一种具有肌肉细胞修复功能的干细胞活性因子组合物的制备方法。

背景技术

干细胞在细胞治疗、组织器官修复、发育生物学、药物学等领域有着极为广阔的应用前景。在基础研究与临床应用中起着越来越重要的作用。然而，相对于许多成体干细胞，肌肉干细胞在国内的研究和临床应用还处于落后状态。骨骼肌是机体中最重要的肌肉之一，负责为多种机体功能提供支持。不同于所有其他组织骨骼肌肌肉组织专门控制主动运动，而个体的激烈活动，运动锻炼，甚至日常行动都在不断制造程度不同的肌肉组织和细胞的物理微损伤。肌肉自身的损伤修复是必须通过肌肉干细胞实现的。人体内的相当数量的肌肉干细胞则在不断的生长分化来执行修复活动，用以修复肌肉微损伤。年轻个体的肌肉组织有强大的修复能力。随着人体的老化，肌肉的功能和修复能力会发生显著降低。目前，进程性的肌无力和再生障碍，困扰着广大的老龄人群。各种肌肉萎缩症，例如杜氏肌营养不良症，也会在年幼和年轻的病人身上发生。

肌肉萎缩症和再生障碍和人体肌肉干细胞的数量和功能的衰竭直接相关。随年龄增长或一些疾病的发生，肌肉干细胞的衰竭持续发生。衰老个体的肌肉干细胞的再生性修复能力随着其老化也逐渐减退直至消失，然而这个过程并非不可逆，体外的培养和刺激可以促进衰老的肌肉干细胞的再生能力的恢复，肌肉干细胞的再生能力和体外培养传代数很高，由于具有较强的端粒酶活性，肌肉干细胞的增生能力很强。从少量组织提取细胞开始培养就能得到稳定细胞系，可以体外连续培养至少30代还保持干细胞的活跃再生活力。肌肉干细胞的活跃再生能力主要体现在强大的再生能力，抗氧化危机能力，和大量活性因子的产生或分泌。强大再生能力体现在肌肉干细胞有强大的多功能分化能力，已有的证据表明肌肉干细胞不仅可分化成肌肉细胞，还可分化成成骨细胞，成软骨细胞，心肌细胞，神经细胞等等。肌肉干细胞已被证明可很好的促进骨、软骨、筋膜、心肌和神经组织损伤的修复。肌肉干细胞的活跃再生能力也体现在肌肉干细胞在正常生理条件下处于更活化的状态。肌肉干细胞由于需要修复肌肉微损伤，相较于其他一些干细胞例如脂肪干细胞，肌肉干细胞是相对被激活的状态。肌肉干细胞也具有较强的自我修复的功能系统。肌肉干细胞的强大抗氧化能力体现在高表达水平的乙醛脱氢酶(ALDH)，超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽(GSH)等。

疤痕是各种创伤造成的正常皮肤组织的外观形态以及组织病理学改变的统一称呼，是机体创伤修复期间必然的产物，长度超过一定的限度，就会引发各种各样的并发症，对患者的健康生活质量造成较大影响。疤痕一般累及表皮或真皮浅层，皮肤表面粗糙或有色素变化，局部平坦、柔软，一般无功能障碍，随着时间的推移，瘢痕将逐渐不明显。研究表明，人体皮肤受损是引发瘢痕的主要因素，其中瘢痕疙瘩就是一种特殊类型，全身诱因也许是主要作用，特别是特异性身体素质因素，并且具有一定的遗传性。肌肉干细胞所具备的增殖分化能力，可以向皮肤受损部分分化，且肌肉干细胞产生的活性因子可以促进新皮肤组织的生成，减少疤痕组织的产生。皮肤衰老是随着年龄增长而发生的皮肤生理性衰老，与真皮成纤维细胞减少、衰老密切相关，肌肉干细胞的基础特征之一即具有多向分化潜能，能在特定条件下激活或分化为成纤维细胞，进而促进创伤愈合和组织修复，由于肌肉组织中成纤维细胞的增多，对皮肤的衰老也起到显著的延缓作用。