[发明专利]一种具有ccdB负筛作用的菌株及其构建方法有效
| 申请号： | 201811305441.7 | 申请日： | 2018-11-02 |
| 公开（公告）号： | CN109929788B | 公开（公告）日： | 2020-03-10 |
| 发明（设计）人： | 蓝田;施金秀;罗燕;蒙伟能 | 申请（专利权）人： | 云舟生物科技(广州)有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 颜希文;罗尧 |
| 地址： | 510663 广东省广州市广州高新技术产业开发区科*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 具有 ccdb 作用 菌株 及其 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种具有ccdB负筛作用的菌株构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)利用Red/ET同源重组技术将Stable菌株中F因子上的ccdA和TetR基因替换为FRT-Kan cassette-FRT DNA序列，得到基因编辑后的F因子；
(2)提供表达FLP重组酶的质粒，通过所述质粒表达的FLP重组酶介导重组反应，删除所述基因编辑后的F因子上两个FRT位点中间的外源序列，即得所述具有ccdB负筛作用的菌株；
其中，所述Red/ET同源重组技术通过删除了Redα基因的pRed/ET载体实现，所述pRed/ET载体中Redβ基因的碱基序列经过优化，优化后的Redβ基因的碱基序列如Seq ID NO.1所示，所述pRed/ET载体中Redγ基因的碱基序列经过优化，优化后的Redγ基因的碱基序列如Seq ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述表达FLP重组酶的质粒为707-FLPe。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述pRed/ET载体中四环素抗性基因替换为Amp抗性基因。
4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述707-FLPe质粒中四环素抗性基因替换为Amp抗性基因。
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