[发明专利]一种仿生态冬虫夏草腺苷含量的检测方法

说明书

本发明涉及仿生态中药材分析领域，特别涉及一种仿生态冬虫夏草腺苷含量的检测方法，方法为高效液相色谱，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，色谱柱ZORBAX Eclipse Plus C18/ZORBAX Eclipse XDB C18，规格为4.6×250mm，5μm；流动相：A:B=85:15（0.01mol/l磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol/l磷酸氢二钠31.5ml，pH8.5，为流动相A，甲醇为流动相B）；检测波长260nm；柱温：25℃，进样量：5ul；流速：1.000ml/min；等度洗脱程序。采用本发明方法，主峰与相邻杂质峰能完全分离，方法准确度、精密度高。

技术领域

本发明仿生态中药材分析领域，特别涉及一种冬虫夏草腺苷含量的检测方法。

背景技术

现有野生冬虫夏草腺苷检测可以参照的方法包括中国药典一部(Ch.P.2015)冬虫夏草腺苷含量测定方法。中国药典一部(Ch.P.2015)条件为：色谱柱：C18(内径3.9-4.6mm，粒径3-10um)；流动相：0.01mol/l磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol/l磷酸氢二钠31.5ml，pH6.5，为流动相A，甲醇为流动相B(A:B＝85：15)，混合方式：未明确；流速：未明确；检测波长：260nm；柱温：未明确；进样量：10μl；供试品溶液：称取供试品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置50ml磨口圆底烧瓶中，精密加入90％甲醇溶液10ml，密塞，摇匀，称定重量，加热回流30min(回流温度未明确)，放冷，再称定重量，用90％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过(过滤材质和孔径未明确)，取续滤液，即得。对照品溶液：取腺苷对照品适量，精密称定，加90％甲醇溶液配制成每1ml含20ug的溶液。限度：腺苷含量不得低于0.010％。中国药典方法在实践操作过程中，主峰与相邻杂质峰不能完全分离，无法确认分离度，无法进行准确度和线性确认。

发明内容

本发明的目的是提供仿生态冬虫夏草腺苷含量检测，主峰与相邻杂质峰能完全分离，且方法的精密度、准确度符合要求。

一种仿生态冬虫夏草腺苷含量检测方法，包括：

1)高效液相色谱；

2)填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；

3)色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18/ZORBAX Eclipse XDB C18；

内径4.6mm，粒径5um，柱长：250㎜；

4)流动相：0.01mol/l磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol/l磷酸氢二钠31.5ml，pH 8.5，为流动相A；甲醇为流动相B，流动相A与流动相B以85:15的比例离线混合；

5)检测波长：260nm；

6)柱温：25℃；

7)流速：1.000ml/min

8)进样量：5ul

9)等度洗脱程序；运行时间：不低于有效成分峰出峰时间的2倍；

10)供试品前处理：称取供试品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置50ml磨口平底烧瓶中，精密加入90％甲醇溶液10ml，密塞，摇匀，称定重量，加热(温度85℃)回流30min，放冷，再称定重量，用90％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，过0.45um有机系滤头，取续滤液作为供试品溶液；精密称取取腺苷对照品适量，加90％甲醇溶液配制成每 1ml含20ug的溶液；

11)限度：腺苷含量不得低于0.010％；

系统适应性理论板数按腺苷峰计算≥2000，腺苷峰与相邻杂质峰的分离度≥1.5。