[发明专利]一种基于MIX抗原包被的HCV NS3抗体检测方法

权利要求书

1.一种基于MIX抗原包被的HCV NS3抗体酶免疫法检测方法，其特征在于，

(1)包被:分别将HCV NS3(1型和6型)MIX抗原用0.01mol/LPBS(pH 7.2)稀释后包被微孔板，100μl/孔，放置4℃冰箱过夜，次日用1×PBST液洗涤3次，扣干密封，4℃储存备用；

(2)加样：将稀释的酶标二抗(羊抗人-IgG)加入酶标孔，100μl/孔，再依次加入1μl血清标本，分为空白对照组、阴性对照组和阳性对照组、待测血清，轻拍混匀；

(3)温育：置37℃温育1小时；

(4)洗涤：弃去孔内液体，PBST液洗涤4遍，扣干；

(5)显色：分别向空白对照组、阴性对照组和阳性对照组、待测血清的每孔加底物A液、底物B液各50μl，轻拍混匀，置37℃温育10分钟；

(6)加入终止液50μl，轻拍混匀；

(7)测定：酶标仪以空白对照孔调零，在波长450nm处测定各孔OD450值，打印测定结果；

(8)结果判定标准：采用比率表示法：用测定标本孔的OD450与阴性标本测定孔OD450(当阴性标本测定孔OD450<0.06时以0.06计)的比值(P/N)表示，当P/N>2.1时判为阳性，否则为阴性。

2.根据权利要求1所述的一种基于MIX抗原包被的HCV NS3抗体酶免疫法检测方法，其特征在于：包被稀释液由PBS、NaCl、KCl、Na₂HPO₄·12H₂O、KH₂PO₄双蒸水组成，0.01mol/LPBS，NaCl 8.0g、KCl 0.2g、Na₂HPO₄·12H₂O 3.58g，KH₂PO₄0.2g，加双蒸水至1L，调pH至7.2。

3.根据权利要求1所述的一种基于MIX抗原包被的HCV NS3抗体酶免疫法检测方法，其特征在于：碳酸盐缓冲液由Na₂CO₃、NaHCO₃、Na₂N₃、双蒸水组成，Na₂CO₃ 1.5g、NaHCO₃ 2.9g、Na₂N₃ 0.2g加双蒸水至1000ml调至pH 9.6。

4.根据权利要求1所述的一种基于MIX抗原包被的HCV NS3抗体酶免疫法检测方法，其特征在于：酶标二抗稀释液Ⅰ由20％甘油、30％小牛血清、50％0.01mol/L PBST组成。

5.根据权利要求1所述的一种基于MIX抗原包被的HCV NS3抗体酶免疫法检测方法，其特征在于：酶标二抗稀释液Ⅱ由NaCl、硫柳汞、Tween-20、二甲基亚砜、小牛血清、磷酸盐缓冲液组成，1.31g NaCl、0.005g硫柳汞、45μl Tween-20、135μl二甲基亚砜、5ml小牛血清、45ml 0.01mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液(PB)混合。

6.根据权利要求1所述的一种基于MIX抗原包被的HCV NS3抗体酶免疫法检测方法，其特征在于：洗涤液由NaCl、KCl、Na₂HPO₄·12H₂O、KH₂PO₄、Tween-20、双蒸水组成，NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na₂HPO₄·12H₂O 3.58g，KH₂PO₄ 0.2g，Tween-20 0.5ml，加双蒸水至1L，调pH至7.2。