[发明专利]一种核酸提取扩增检测试剂盒

权利要求书

1.一种核酸提取扩增检测试剂盒，其特征在于，包括：裂解液试剂盒以及PCR管，裂解液试剂盒内盛放核酸裂解液，通过所述核酸裂解液的作用使病毒核酸释放出来并纯化，裂解纯化后的产物可以直接进行PCR检测；所述PCR管内放置直接用于荧光定量PCR测量的冷冻干粉PCR扩增体系试剂，所述冷冻干粉PCR扩增体系试剂是以PCR反应缓冲液、DNA聚合酶、反应特异性引物、探针以及冻干保护剂为原料通过冷冻干燥工艺制备的所得物；

其中，所述核酸裂解液包括GuHCl、NaOH、乙二胺四乙酸、三羟甲基氨基甲烷、NaCl、聚乙二醇辛基苯基醚、表面活性剂、苯酚、异戊醇；其中GuHCl的浓度为5.75g/10ML；乙二胺四乙酸0.038g/10ML；三羟甲基氨基甲烷0.062g/10ML；NaCl 0.011g/10ML；聚乙二醇辛基苯基醚2.7%（体积比例）；表面活性剂0.85%（体积比）；核酸裂解液中加入1%-2.5%（体积比例）的苯酚、异戊醇混合液，其中苯酚、异戊醇体积比20:1-25:1；所述表面活性剂采用以下任意一种：十二烷基硫酸钠、溴化十六烷基甲三胺、聚乙烯吡咯烷酮、月桂酰基氨酸钠；裂解液PH值为4-4.5；

所述冷冻干粉PCR扩增体系试剂采用如下方式制备：将PCR反应缓冲液、DNA聚合酶、反应特异性引物、探针与冻干保护剂溶液按照预定比例混合后，分三个阶段进行冷冻干燥；其中，第一阶段为预冷冻，缓慢降温至-35至-40摄氏度，降温时长大于1小时，并在该温度条件下保持2.5小时；第二阶段为冷冻干燥阶段，温度保持-15至-20摄氏度，保持5小时，其中气压保持在0.1mbar；第三阶段为加强干燥，温度保持15-25摄氏度，干燥时间2小时，气压保持0.1mbar；其中，制备所述冷冻干粉PCR扩增体系试剂采用的冻干保护剂包括：甘露醇、聚乙二醇、麦芽糖、抗坏血酸以及聚乙烯吡咯烷酮，以加入焦磷酸酶的去离子水配制上述成分作为所述冻干保护剂溶液，其中，甘露醇加入量3-5g/10ML；聚乙二醇加入量2.5-3g/10ML；麦芽糖加入量15-18g/10ML；抗坏血酸加入量0.4-0.6g/10ML；聚乙烯吡咯烷酮0.8-1.5g/ML；焦硫酸酶的加入量为1.1-1.6g/10ML；制备所述冷冻干粉PCR扩增体系的试剂中还包含MoS2，加入量为55μg/10ML；并且，制备所述冷冻干粉PCR扩增体系试剂采用的PCR反应缓冲液包括：脱氧核糖核苷三磷酸、氯化镁。