[发明专利]二氧化锰纳米片介导的比率荧光生物传感器用于细胞内microRNA的检测与成像

权利要求书

1.一种体外检测miRNA-21的生物传感器，其包含MnO₂纳米片及吸附在MnO₂纳米片上的H1探针和H2探针；

所述H1探针和H2探针均为发夹探针，H1探针和H2探针上存在互补序列，互补序列分别位于其发夹茎中，H1探针含有荧光供体，H2探针含有荧光受体；H1探针中存在目标识别单元；

H1探针和H2探针在待测目标miRNA-21和还原剂存在下自组装形成H1-H2双链体结构；

荧光供体位于H1探针的3’末端，H1探针与H2探针自组装形成H1-H2双链体结构，荧光供体和荧光受体相互靠近发生荧光共振能量转移，产生供体荧光信号与受体荧光信号的变化；

所述H1探针序列为：

5’-TCAGACTGATGTTCGTAGCTTATCAACATCAGTCTGATAAGCTA-FAM-3’；

所述H2探针的序列为：

5’-TTCGT-(TAMRA)AGCTTATCAGACTGATGTTGATAAGCTACGAACATCAGT-3’；

在还原剂的存在下，所述生物传感器中的MnO₂纳米片产生Mn²⁺，释放H1探针和H2探针；待测目标miRNA-21和H1探针上的目标识别单元识别杂交，暴露H1探针上隐藏在发夹茎上与H2探针互补的序列，H2探针置换出待测目标miRNA-21，与H1探针自组装形成H1-H2双链体结构；H1探针上的荧光供体和H2探针上的荧光受体相互靠近发生荧光共振能量转移，产生供体荧光信号与受体荧光信号的变化，实现传感。

2.一种体外检测miRNA-21的试剂盒，其包括权利要求1中所述的H1探针和H2探针、MnO₂纳米片、Tris-HCl缓冲液和还原剂GSH，所述H1探针和H2探针吸附于MnO₂纳米片上；

所述试剂盒的使用方法包括：将MnO₂纳米片与H1探针和H2探针在Tris-HCl缓冲液中混合，加入还原剂后，加入待测样品温育后检测受体荧光信号和供体荧光信号的变化；

所述温育条件为37℃下温育0.5-5小时。