[发明专利]强水溶性目标物的通用型沉淀净化剂及其色谱、质谱检测的前处理方法

说明书

本发明公开了强水溶性目标物的沉淀净化剂及其用于色谱、质谱检测的通用型前处理方法，特点是包括一次沉淀剂和二次沉淀剂，若检测与金属离子发生吸附沉淀作用的极性目标物时，一次沉淀剂由乙腈、低级醇、乙酸铵缓冲液和EDTA‑Na₂溶液按体积比4:1:4:1的比例混合而成；若检测其余强水溶性目标物时，一次沉淀剂由乙腈、低级醇和乙酸铵缓冲液按体积比4:1:5的比例混合而成；二次沉淀剂为二氯甲烷或由二氯甲烷和三氯甲烷按任意比例混合而成，优点是具有强沉淀效果和去杂质的净化作用，对目标物无破坏作用，通用性良好，回收率高，成本消耗极低，而且最终液为纯水相，不含有机溶剂便于大体积进样而保持好的色谱峰型。

技术领域

本发明涉及一种沉淀净化剂，尤其是涉及强水溶性目标物的通用型沉淀净化剂及其色谱、质谱检测的前处理方法。

背景技术

奶粉、牛奶、饲料、肉类、内脏等复杂食品基质中低含量的极性强的强水溶性目标物的色谱、质谱分析面临着巨大挑战，难点主要集中在沉淀蛋白和去除其他杂质的前处理上。常用的蛋白沉淀试剂如三氯乙酸、乙酸溶液（5-10%）等沉淀效果较差；用高氯酸溶液（5%）虽然沉淀效果极佳，但对于酸性或强氧化性敏感的目标物破坏性很强，回收率差；乙酸锌和氰化亚铁搭档的沉淀效果较好，可惜也容易沉淀吸附一部分待测物，尤其是易被金属离子吸附的四环素类、杆菌肽等，引起回收率低下的现象。对于采用离子色谱仪、液质联用仪分析时，不引入无机盐、强酸、强氧化性等物质会干扰检测或污染仪器，往往会增加一步费时的固相萃取净化步骤。由于待测物涉及强极性化合物，不溶于有机溶剂，故不宜采用纯的有机溶剂（如乙腈、甲醇、丙酮等）沉淀，而采用50-60％乙腈水溶液沉淀剂，具有较好的程度效果，但沉淀并不彻底。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种通用性良好，具有强的沉淀效果和高的回收率，同时又具有去杂质的净化作用，不引入干扰检测或污染仪器的无机盐、强酸、强氧化性等物质，无须其他净化步骤的强水溶性目标物的沉淀净化剂及其色谱、质谱检测的前处理方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：

1、一种强水溶性目标物的沉淀净化剂，包括一次沉淀剂和二次沉淀剂，若检测与金属离子发生吸附沉淀作用的极性目标物时，所述的一次沉淀剂由乙腈、低级醇、乙酸铵缓冲液和EDTA-Na₂溶液按体积比4:1:4:1的比例混合而成；若检测其余强水溶性目标物时，所述的一次沉淀剂由乙腈、低级醇和乙酸铵缓冲液按体积比4:1:5的比例混合而成；所述的二次沉淀剂为二氯甲烷或由二氯甲烷和三氯甲烷按任意比例混合而成。

所述的低级醇为甲醇或乙醇；所述的与金属离子发生吸附沉淀作用的极性目标物为四环素类或者杆菌肽。甲醇或乙醇可以避免乙腈和水相的分层。

所述的乙酸铵缓冲液中的乙酸铵浓度为0.1mol/L，pH为4.8；所述的EDTA-Na₂溶液中EDTA-Na₂浓度为0.1mol/L。

2、一种强水溶性目标物的沉淀净化剂用于色谱、质谱检测的前处理方法，包括以下步骤：

（1）第一步沉淀

称取适量待测样品于塑料离心管中，加入等量的一次沉淀剂和正己烷，以10000rmp高速匀浆2 min，漩涡混合5 min，4000转/min离心10 min，分成两层清液，下层清液通过脱脂棉快速过滤另一试管中；其中所述的待测样品和所述的一次沉淀剂的混合比例为2-3g：10.0 mL；第一次沉淀后的提取液接近澄清，但沉淀并不彻底，基质干扰仍可能较大；

（2）第二步沉淀

从取适量上述滤液于塑料试管中，加入3倍滤液体积的第二沉淀剂，充分漩涡混匀2 min，10000转/min离心5-10min，乙腈和低级醇从水相中脱离，转移到下层有机相中，在上下两层交界处会形成不同程度的沉淀物，取上层的纯水相液体，经0.2 μm孔径的尼龙滤膜过滤到进样瓶中，待LC或LC-MS/MS测定。