[发明专利]禽流感分型的可视化芯片

说明书

本发明提供了一组禽流感分型检测探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑8所示；H5亚型探针的序列如SEQ ID NO.1所示，H7亚型探针的序列如SEQ ID NO.2所示，H9亚型探针的序列如SEQ ID NO.3所示，N1亚型探针的序列如SEQ ID NO.4所示，N9亚型探针的序列如SEQ ID NO.5所示，N2亚型探针的序列如SEQ ID NO.6所示；禽流感病毒NP基因探针的序列如SEQ ID NO.7所示；λ定位基因探针的序列如SEQ ID NO.8所示。

技术领域

本发明涉及病毒检测领域，特别涉及禽流感分型的可视化芯片检测。

背景技术

禽流感是由正粘病毒科A型流感病毒引起的综合性病症，高致病性禽流感可导致100％的发病率和死亡率，危害人和家禽健康的烈性传染病。禽流感病毒(Avian InfluenzaVirus，AIV)的NP蛋白结构高度保守，可作为AIV分类及区别于其他病原的基础。禽流感病毒血清型的类型较多，其中血凝素(HA)亚型有16种，神经氨酸酶(NA)亚型有9种类型。亚型的类别不仅较多，同时其核酸的8个基因组片段可以随机互换，引起毒株出现重组多样性，导致出现新的禽流感病毒毒株，并且不断地发生变异，给疾病诊断带来了一定困扰。

传统的RT-PCR技术常用于禽流感病毒亚型的检测。Leijon等人利用实时荧光定量RT-PCR方法来达到区别禽流感病毒不同亚型的目的。研究者们将限制性内切酶运用于RT-PCR技术中，将RT-PCR产物经过不同的限制性内切酶处理后达到区别禽流感亚型的目的。由于限制性内切酶数量有限，因此该方法的缺点为不能对多种亚型进行同时区别。因此，面对禽流感病毒的不断变异现象，急需建立一种快速、低成本、容易操作且结果敏感性强、特异性好的检测方法。

基因芯片技术因其能同时检测成百上千种基因被广泛地应用于病毒的分型检测中。早期的文献已有利用基因芯片对禽流感病毒进行分型的报道，但其检测结果需要依赖昂贵的荧光扫描仪观察结果，因此限制了基因芯片在临床中的广泛使用。

金标银染显色的可视化芯片通过生物素和链酶亲和素特异性结合，引入纳米金，利用纳米金催化的氧化还原反应，形成肉眼可见的黑色银染信号。其脱离昂贵的荧光扫描仪，且具有操作简单、灵敏度高等特点，目前已经广泛应用于基因突变分析、疾病诊断、药物筛选等方面。然而，至今尚未见金标银染显色的可视化芯片用于禽流感分型的检测。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种禽流感分型的可视化芯片，可对禽流感H5、H7、H9、N1、N9和N2六种亚型进行可视化检测。

本发明提供了一组禽流感分型检测探针，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ IDNO.1-8所示；

H5亚型探针的序列如SEQ ID NO.1所示，H7亚型探针的序列如SEQ ID NO.2所示，H9亚型探针的序列如SEQ ID NO.3所示，N1亚型探针的序列如SEQ ID NO.4所示，N9亚型探针的序列如SEQ ID NO.5所示，N2亚型探针的序列如SEQ ID NO.6所示；禽流感病毒NP基因探针的序列如SEQ ID NO.7所示；λ定位基因探针的序列如SEQ ID NO.8所示。

前述探针，其特征在于：5’端连接了一个氨基。

本发明还提供了一组PCR引物，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.9-24所示；

H5亚型引物的序列如SEQ ID NO.9-10所示，H7亚型引物的序列如SEQ ID NO.11-12所示，H9亚型引物的序列如SEQ ID NO.13-14所示，N1亚型引物的序列如SEQ ID NO.15-16所示，N9亚型引物的序列如SEQ ID NO.17-18所示，N2亚型引物的序列如SEQ ID NO.19-20所示；禽流感病毒NP基因引物的序列如SEQ ID NO.21-22所示；λ定位基因引物的序列如SEQ ID NO.23-24所示。