[发明专利]一种黄牛IGF1R基因插入/缺失的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种黄牛IGF1R基因插入/缺失的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

以待测黄牛基因组DNA为模板，以引物对P1为引物，通过PCR扩增黄牛IGF1R基因部分片段；再对PCR扩增得到的片段进行琼脂糖凝胶电泳；根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定黄牛IGF1R基因28-bp插入/缺失多态性位点的基因型；所述位点为IGF1R基因参考序列AC_000178.1:g 8086838-8086865del TGTCCTGGGGCACGTGGTCTCGGCCCTC；

所述引物对P1为：

上游引物：5’-CGAAGTGGGACTTGAGGC-3’；

下游引物：5’-AGACAACTGGGAGAAGGGAC-3’；

所述黄牛为晋南牛。

2.根据权利要求1所述一种黄牛IGF1R基因插入/缺失的检测方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应程序为：

1)95℃预变性5min，然后进入步骤2)；

2)循环一：95℃变性30s，68℃复性30s，72℃延伸30s；共18个循环，第一次循环后，复性温度逐次降低1℃，然后进入步骤3)；

3)循环二：95℃变性30s，58～60℃复性30s，72℃延伸30s；共20个循环，然后进入步骤4)；

4)72℃延伸10min。

3.根据权利要求1所述一种黄牛IGF1R基因插入/缺失的检测方法，其特征在于：所述琼脂糖凝胶电泳采用的琼脂糖凝胶的质量浓度为2.5％。

4.根据权利要求1所述一种黄牛IGF1R基因插入/缺失的检测方法，其特征在于：所述插入/缺失多态性位点的基因型的电泳结果为：插入/插入基因型表现为405bp一条带纹；插入/缺失基因型表现为405bp和377bp两条带纹；缺失/缺失基因型表现为377bp一条带纹。

5.一种黄牛IGF1R基因插入/缺失的检测试剂盒，该试剂盒包括用于PCR扩增黄牛IGF1R基因中含有28-bp插入/缺失多态性位点的部分片段的引物对P1，所述引物对P1为：

上游引物：5’-CGAAGTGGGACTTGAGGC-3’；

下游引物：5’-AGACAACTGGGAGAAGGGAC-3’；

所述位点为IGF1R基因参考序列AC_000178.1:g 8086838-8086865delTGTCCTGGGGCACGTGGTCTCGGCCCTC；

所述黄牛为晋南牛。

6.一种如权利要求1所述的黄牛IGF1R基因插入/缺失的检测方法在黄牛分子标记辅助选择育种中的应用，其特征在于：所述插入/缺失多态性位点的插入/插入基因型可作为晋南牛体斜长、胸围和体重的DNA标记。