[发明专利]一种用于预测绵羊多羔性状的SNP分子标记及其应用

权利要求书

1.一种预测绵羊多羔性状的方法，其特征在于，所述方法通过检测SNP分子标记位点的基因型进行判定，并且基于绵羊基因组序列信息版本号Oar_v3.1，所述SNP分子标记位于绵羊第7号染色体基因组序列第89505005bp位点。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，基因型被判定为AA基因型、GA基因型或GG基因型，并且具备AA基因型的母羊产羔数高于GG型母羊。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)提取待测绵羊的基因组DNA；

(2)以待测绵羊的基因组DNA为模板，利用引物组中的正向引物和反向引物进行PCR扩增反应，其中，所述引物组包括用作PCR扩增引物的具有SEQ IN NO. 1所示序列的所述正向引物、具有SEQ ID NO. 2所示序列的所述反向引物和具有SEQ ID NO. 3所示序列的延伸引物；

(3)用SAP酶对PCR扩增产物进行消化，获得酶消化产物，其中，对PCR扩增产物进行消化时使用的SAP酶消化体系以2µL计为：SAP缓冲液0.17µL，SAP酶0.3µL，去离子水补至2µL；反应条件为：37℃ 40min，85℃ 15min，25℃保存；

(4)以所述酶消化产物为模板，利用所述引物组中的所述延伸引物进行延伸反应，获得延伸产物；

(5)分析所述延伸产物，从而对所述SNP分子标记的位点的基因型进行判定。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)提取待测绵羊的基因组DNA；

(2)以待测绵羊的基因组DNA为模板，利用引物组中的正向引物和反向引物进行PCR扩增反应，其中，所述引物组包括用作PCR扩增引物的具有SEQ IN NO. 1所示序列的所述正向引物、具有SEQ ID NO. 2所示序列的所述反向引物和具有SEQ ID NO. 3所示序列的延伸引物；

(3)用SAP酶对PCR扩增产物进行消化，获得酶消化产物，其中，对PCR扩增产物进行消化时使用的SAP酶消化体系以2µL计为：SAP缓冲液0.17µL，SAP酶0.3µL，去离子水补至2µL；反应条件为：37℃ 40min，85℃ 15min，25℃保存；

(4)以所述酶消化产物为模板，利用所述引物组中的所述延伸引物进行延伸反应，获得延伸产物；

(5)分析所述延伸产物，从而对所述SNP分子标记的位点的基因型进行判定。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：

步骤(2)中PCR扩增反应使用的反应体系以5μL计为：20-50ng/μL基因组DNA 1µL，10×PCR反应缓冲液0.5µL，25mmol/L MgCl₂ 0.4µL，25μmol/L dNTPs 0.1µL，PCR引物混合物1µL，5U/μL Taq DNA聚合酶0.2µL，去离子水补至5µL；PCR扩增反应的扩增程序为：95℃ 2min；95℃ 30s，56℃ 30s，72℃ 60s，45个循环；72℃ 5min；和/或

步骤(4)中延伸反应体系以2µL计为：iplex缓冲液(iplex Buffer) 0.2µL，终止子混合物(Terminator mix)0.2µL，延伸引物混合物(Extend primer mix) 0.94µL，iplex 酶(iplex Enzyme)0.041µL，用去离子水补至2µL；延伸反应条件为：94℃ 30s；{94℃ 5s，[(52℃ 5s，80℃ 5s) 5个循环]，40个循环}；72℃ 3min。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法在绵羊多羔性状预测中的应用。