[发明专利]一种保护血细胞的中药提取物及其制备方法与用途

权利要求书

1.一种用于保护血细胞的中药提取物的制备方法，所述中药提取物的活性成分来自香椿。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述中药提取物的活性成分来自香椿的多糖；和/或所述保护血细胞是对血细胞的冻存的保护；和/或所述血细胞是鸡血细胞。

3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述中药提取物的制备方法包括如下步骤：

(a)煎煮香椿，过滤，取滤液，形成第一混合物；

(b)用乙醇处理所述第一混合物，形成第二混合物；

(c)抽滤所述第二混合物，得滤液，形成第三混合物；

(d)离心所述第三混合物，取上清，即初级香椿提取物溶液。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述中药提取物的制备方法还包括如下步骤：

(e)除去所述初级香椿提取物溶液中的蛋白，得到香椿提取物粗品；

优选地，所述中药提取物的制备方法还包括如下步骤：

(f)将所述香椿提取物粗品冻干。

5.如权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于：

所述香椿选自香椿叶粉末；

可选地，在步骤(a)之前，先用水浸泡香椿，优选15-45min，更优选30min；

可选地，用水煎煮步骤(a)产生的药渣，过滤，取滤液与步骤(a)产生的所述滤液合并使用；

优选地，在步骤(b)中，用50-70％优选60％的乙醇处理所述第一混合物，形成所述第二混合物；

可选地，用乙醇洗涤步骤(a)产生的滤渣，过滤，取滤液与步骤(b)产生的所述第二混合物合并使用；

可选地，在步骤(c)中，使用真空抽滤泵在0.5-1.0bar下进行抽滤，优选地，使用真空抽滤泵在0.8bar下进行抽滤；

可选地，在步骤(c)之前，静置所述第二混合物，优选12-36h，更优选24h；

可选地，在步骤(d)中，3000-5000r/min离心所述第三混合物10-30min，优选4000r/min离心20min；

可选地，在步骤(e)中，将所述初级香椿提取物溶液与Sevage试剂按照体积比3-5:1优选4：1混合，振荡，静置，取出上清液，得到所述香椿提取物粗品，其中，所述Sevage试剂的成分为体积比为3-5:1优选4:1的氯仿与正丁醇混合液；

可选地，在步骤(f)中，在-80℃冰箱冷冻6-24h优选12h，再置于冻干机中冷冻干燥。

6.一种用于保护血细胞的中药提取物，所述中药提取物是通过权利要求1-5中任一项所述的方法制备得到的。

7.如权利要求1-5中任一项所述的方法或如权利要求6所述的中药提取物在制备细胞冻存保护剂中的用途。

8.一种用于保护冻存血细胞的保护方法，所述保护方法包括向血细胞冻存溶液添加如权利要求6所述的中药提取物和氢气。

9.如权利要求8所述的保护方法，所述保护方法包括如下步骤：

(i)在所述血细胞冻存溶液中添加如权利要求6所述的中药提取物，形成第四混合物；

(ii)取血液，加入抗凝剂，稀释到目的浓度，形成第一冷冻血液混合物；

(iii)将所述第四混合物加入所述第一冷冻血液混合物，形成第二冷冻血液混合物；

(iv)向所述第二冷冻血液混合物中通入氢气，形成第三冷冻血液混合物，对所述第三冷冻血液混合物进行冷冻储存。

10.如权利要求9所述的保护方法，其特征在于：

所述血细胞冻存溶液的成分为：按照体积比5-15％DMSO、60-80％DMEM、5-15％FBS，且总体积为100％，优选10％DMSO、70％DMEM、20％FBS；和/或

在步骤(i)中，以所述血细胞冻存溶液为溶剂，所述中药提取物的浓度为：1-15mg/L，优选2-10mg/L，更优选6mg/L；和/或

所述抗凝剂为肝素；和/或

在步骤(ii)中，采用的pH＝6.9的PBS缓冲液稀释所述血液，可选，稀释20-50倍体积，优选稀释40倍体积；和/或

在步骤(iii)中，所述第四混合物以1:2-10优选1:5的体积比加入所述第一冷冻血液混合物；和/或

在步骤(iv)中，向所述第二冷冻血液混合物中通入氢气的步骤为：将氢气缓慢的通入所述第二冷冻血液混合物中，持续3-10min，优选5min，优选通入氢气的速度为0.04-0.06L/min，更优选0.05L/min。