[发明专利]一种实验室的微生物污染鉴别方法

权利要求书

1.一种实验室的微生物污染鉴别方法，其特征在于：所述鉴别方法采用巢式PCR对实验室微生物16S rRNA进行高通量测序，测序结果与微生物对照表进行对比，无重叠的微生物判断为污染物。

2.根据权利要求1所述的实验室的微生物污染鉴别方法，其特征在于：微生物对照表包括实验室常见污染微生物对照表、生活住宅区常见微生物对照表和ICU中检测到的微生物对照表。

3.根据权利要求1所述的实验室的微生物污染鉴别方法，其特征在于，所述鉴别方法包括如下步骤：

a)高通量测序：将采集到的实验室DNA样本采用巢式PCR扩增法对16S rRNA基因进行扩增后进行Illumina测序；

b)数据库对比：根据采样地点的不同将实验室常见污染微生物对照表、生活住宅区常见微生物对照表和ICU中检测到的微生物对照表作为数据库，将测序结果与所述数据库进行对比，高度重叠的共有属和部分重叠的特有属为环境中常见菌，通过文献查证与三个对照表无任何重叠的特有属为潜在污染物；

c)污染物鉴定：鉴定步骤b)中找出的潜在污染物并推测污染源头，根据回溯分析法查找原始数据确定菌的最丰度所在的样本，确定污染物的来源，再查证菌属对于实验室的影响。

4.根据权利要求1所述的实验室的微生物污染鉴别方法，其特征在于：所述鉴别方法还包括取样步骤，所述取样步骤取实验室自身微生物群落进行鉴别，取样时选择实验室关键平台。

5.根据权利要求4所述的实验室的微生物污染鉴别方法，其特征在于，所述实验室关键平台包括：门、窗、地板、水池、实验桌面和/或超净台。

6.根据权利要求1所述的实验室的微生物污染鉴别方法，其特征在于：步骤b)具体包括：原始测序结果的初步质量控制、OUT聚类、Alpha多样性分析和生物标志物的查找。

7.根据权利要求6所述的实验室的微生物污染鉴别方法，其特征在于：所述原始测序结果的初步质量控制采用FastQC软件进行。

8.根据权利要求6所述的实验室的微生物污染鉴别方法，其特征在于：所述OUT聚类及多样性分析采用QIIME软件进行。

9.根据权利要求8所述的实验室的微生物污染鉴别方法，其特征在于：所述QIIME软件对样本进行拆分后去除序列中的嵌合体及长度边缘化的序列后进行OUT聚类，挑选需要的数据导入R进行再次可视化。

10.根据权利要求8所述的实验室的微生物污染鉴别方法，其特征在于：所述Alpha多样性分析使用SPSS对Alpha分析多样性的结果进行单因素方差分析比较各组微生物群落组成的差异性。