[发明专利]一种定量检测血清、血浆中HER-2蛋白含量的试剂盒

说明书

本发明公开了一种采用磁微粒化学发光法定量检测血清、血浆中HER‑2蛋白含量的试剂盒，该试剂盒包括包被有HER‑2单抗的磁微粒混悬液、含有HRP标记HER‑2单抗的酶结合物、样品稀释液和校准品四个组分。本发明的优点在于试剂盒操作简单方便，检测灵敏度高，特异性强，检测范围偏宽（0.5~500ng/mL），免去了临床上超限稀释的麻烦；同时本发明配制的特殊的样品稀释液，解决了新旧样本差的问题，降低了假阳和漏检的概率，大大提高了HER‑2检测的准确性，基本可以满足临床检测需求。此外，本发明的试剂盒通过定量检测血清、血浆中HER‑2蛋白含量，可辅助用于乳腺癌、胃癌的早期诊断、疗效评价及预后跟踪等。

技术领域

本发明涉及免疫学检测领域，尤其是涉及一种采用磁微粒化学发光法定量检测血清、血浆中HER-2蛋白含量的试剂盒。

背景技术

人表皮生长因子受体2（HER-2/neu）蛋白是具有酪氨酸蛋白激酶活性跨膜糖蛋白，是EGFR家族成员之一，人类该基因定位于染色体17q12，其编码产物为185kD的跨膜蛋白p185，由1255个氨基酸组成，720-987位属于酪氨酸激酶区。HER-2/neu蛋白由胞外的配体结合区、单链跨膜区及胞内的蛋白酪氨酸激酶区三部分组成。由于目前尚未发现能与HER-2/neu蛋白直接结合的配体，其主要通过与家族中其他成员包括HER-l/erbB1、HER-3/erbB3、HER-4/erbB4形成异二聚体而与各自的配体结合。HER-2/neu蛋白常为异二聚体首选伴侣，且活性常强于其它异二聚体。当与配体结合后，主要通过引起受体二聚化及胞浆内酪氨酸激酶区的自身磷酸化激活酪氨酸激酶的活性。现已证实，HER-2/neu的过度表达可潜在激活EGFR的信号通路，同时可促进EGFR介导的转化和肿瘤的发生。

研究显示，30％以上的人类肿瘤中存在HER-2基因的扩增或过度表达，如乳腺癌、胃癌、卵巢癌、肺腺癌、原发性肾细胞癌、子宫内膜癌等，20％-30％的原发性浸润性乳腺癌有HER-2/neu基因的扩增或过度表达，转移性乳腺癌患者中HER-2/neu阳性率高达90%。目前HER-2/neu是乳腺癌生存期和复发的独立预测因子，也可预测乳腺癌的药物治疗效果，包括对赫赛汀（曲妥珠单抗）靶向治疗疗效的指导和监测、对紫杉醇及蒽环类药物治疗的反应、对三苯氧胺的耐药性。

胃癌是世界第二致死癌症，中国为高发区，约16%转移性胃癌或胃-食管肿瘤患者为HER-2/neu阳性(TOGA实验)。所有的胃或胃食管结合部癌患者都应在初次诊断时检测肿瘤的HER-2/neu状态，HER-2/neu在胃癌中过表达预示更差的疾病结局，以及进展性更强的疾病类型，准确的胃癌HER-2/neu表达和基因扩增检测结果是进展期胃癌HER-2/neu靶向治疗患者筛选和疗效预测的前提。

目前市面上的HER-2检测技术主要有免疫组化法、荧光原位杂交法和化学发光法。免疫组化法和荧光原位杂交法不但操作繁琐，价格昂贵，更重要的是不能定量检测样本中的HER-2蛋白含量，从而无法实现对肿瘤患者进行治疗效果评价及预后复发监测。SiemensHealthcare Diagnostics Inc.公司生产的HER-2/neu蛋白测定试剂盒(化学发光法)，作为进口试剂盒，价格较贵，检测范围偏窄（0.5~350ng/mL），不能完全满足临床需求。中国专利CN106932583A公开了一种HER-2检测试剂盒(化学发光法)，也同样存在检测范围偏窄（0.5~350ng/mL）的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用化学发光法制备的检测范围更宽，基本能满足临床检测需求的定量检测血清、血浆中HER-2蛋白含量的试剂盒。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的定量检测血清、血浆中HER-2蛋白含量的试剂盒，包括包被有HER-2单抗的磁微粒混悬液、含有HRP标记HER-2单抗的酶结合物、样品稀释液和校准品四个组分。

所述四个组分所用的缓冲液均采用1,3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷（Bis-Tris），PH=6.3~ 9.5。