[发明专利]一种评价叶酸代谢能力的扩增引物、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种评价叶酸代谢能力的扩增引物，其特征在于，包括用于检测rs1801133的第一引物对、用于检测rs1801131的第二引物对、用于检测rs1801394的第三引物对和用于检测rs1805087的第四引物对，其中所述第一引物对包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述第二引物对包括SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列，所述第三引物对包括SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列，所述第四引物对包括SEQ IDNO.7和SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列。

2.一种评价叶酸代谢能力的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的评价叶酸代谢能力的扩增引物。

3.根据权利要求2所述的一种评价叶酸代谢能力的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含PCR缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、2X Taq酶和用于提取待测样品口腔黏膜细胞DNA的试剂。

4.一种评价叶酸代谢能力的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：提取待测样品的口腔黏膜细胞DNA；

步骤2：分别用SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列扩增MTHFR基因C677T，用SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列扩增MTHFR基因A1298C，用SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列扩增MTRR基因A66G，用SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列扩增MTR基因A2756G，以步骤1提取的口腔黏膜细胞DNA为模板，分别进行PCR反应，各取20uL体系，分别包括:

50ng/uL口腔黏膜细胞DNA模板1uL、1uL的SEQ ID NO.1、1uL的SEQ ID NO.2、10uL的2XTaq Mix和7uL的ddH₂O；

50ng/uL口腔黏膜细胞DNA模板1uL、1uL的SEQ ID NO.3、1uL的SEQ ID NO.4、10uL的2XTaq Mix和7uL的ddH₂O；

50ng/uL口腔黏膜细胞DNA模板1uL1uL的SEQ ID NO.5、1uL的SEQ ID NO.6、10uL的2XTaq Mix和7uL的ddH₂O；

50ng/uL口腔黏膜细胞DNA模板1uL、1uL的SEQ ID NO.7、1uL的SEQ ID NO.8、10uL的2XTaq Mix和7uL的ddH₂O；

步骤3：分别进行PCR扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测；

步骤4：将扩增反应进行纯化，进行PCR测序；

步骤5：用Chromas软件分析步骤4的PCR测序结果。

5.根据权利要求4所述的一种评价叶酸代谢能力的方法，其特征在于，步骤1中，所述提取待测样品的口腔黏膜细胞DNA，采用口腔拭子基因组DNA提取试剂盒进行。

6.根据权利要求4所述的一种评价叶酸代谢能力的方法，其特征在于，步骤3中，所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性5min；接着进入循环，94℃变性30s，60℃退火20s，72℃延伸30s，共34个循环；之后，继续72℃延伸5min；4℃保存。

7.根据权利要求4所述的一种评价叶酸代谢能力的方法，其特征在于，步骤3中，所述琼脂糖凝胶的质量百分数为1％。

8.根据权利要求4所述的一种评价叶酸代谢能力的方法，其特征在于，步骤4中，所述PCR测序的反应程序为：96℃预变性1min；接着进入循环，96℃变性10s，50℃退火5s，60℃退火4min，共25个循环；4℃保存。