[发明专利]一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体及其制备方法

权利要求书

1.一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体，其特征在于：所述脂质体由紫杉醇、星型胆酸功能化聚乳酸、大豆磷脂、胆固醇所构成的载药缓释脂质体及在其表面修饰的白细胞膜组成。

2.如权利要求1所述的一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体，其特征在于：所述脂质体中各组分的质量百分比为：紫杉醇5-10％、大豆磷脂50-70％、胆固醇15-25％、星型胆酸功能化聚乳酸6-12%、白细胞膜2-6%。

3.一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

（1）紫杉醇缓释脂质体的制备：称取紫杉醇、大豆磷脂、胆固醇和星型胆酸功能化聚乳酸，溶于氯仿中，于35～40 ℃下减压旋转蒸发除去溶剂，直至形成脂质体薄膜，置真空干燥器中24 h，加入磷酸缓冲液于40 ℃恒温水浴旋转水化1 h，冰浴探头超声4～6 min，最后通过微射流高压均质机处理，过微孔滤膜，得到紫杉醇缓释脂质体混悬液；

（2）白细胞膜的制备：①分离白细胞：选取大鼠并通过眼窝收集全血，用等量的 EDTA-PBS缓冲液稀释，加入至离心管中，备用；取9% 聚蔗糖和 15.2% 泛影葡胺混合，用蒸馏水配制成比重为 1.114g/ml 的溶液，用0.3%氯化钠溶液调节渗透压至540 mOsm/L，沿管壁加入至上述离心管中,以700×g的离心力离心30min，用移液枪缓慢吸取中间的乳白色云雾状层，用EDTA- PBS缓冲液清洗, 离心，收集白细胞；

②白细胞膜的分离与纯化：收集的白细胞用白细胞低渗裂解液重新悬浮，用匀浆机冰浴均质2 min，4 ℃下低渗裂解24 h，以1200×g的离心力离心10min，弃去上清液，将收集的白细胞膜分别用30%、45%、50%三个浓度的梯度蔗糖溶液于4 ℃下以24000×g的离心力离心30 min，收集纯化的白细胞膜，置于2～6 ℃冰箱中备用；

（3）白细胞膜对紫杉醇缓释脂质体的修饰：将制备好的白细胞膜与脂质体振荡混合，孵育融合12 h，离心，用PBS缓冲液洗涤，然后用蒸馏水重新混悬，使用超声波仪以35 kHz的频率和80 W的功率，超声60 s，过微孔滤膜，高速离心，弃去上清液，冷冻干燥，即得白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体。

4.如权利要求3所述的一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体的制备方法，其特征在于：步骤（1）微射流高压均质机处理时，均质压力为120 MPa，均质温度为37 ℃，均质次数为5次。