[发明专利]一种甘蔗组织培养中外植体防褐化的方法

权利要求书

1.一种甘蔗组织培养中外植体防褐化的方法，其特征在于，将成熟甘蔗茎秆从上至下的9-15位芽经消毒，用抗氧化剂浸泡后剥取茎尖分生组织得到外植体，将外植体以MS+6-BA为基础培养基培养，即可有效抑制甘蔗外植体的褐化。

2.根据权利要求1所述的甘蔗组织培养中外植体防褐化的方法，其特征在于，所述外植体的采集步骤包括：选取生长健壮、无病虫害的成熟甘蔗茎秆，剥去外叶鞘，截取从上至下9-15位间的单芽，52℃水浴30min后，38-40℃恒温培养，待腋芽长至8-12cm，将其切下，经消毒及抗氧化处理后，在无菌水或1％的无菌柠檬酸溶液中剥取茎尖1-2mm分生组织，即得到所述甘蔗外植体。

3.根据权利要求1或2所述的甘蔗组织培养中外植体防褐化的方法，其特征在于，所述消毒方法为：先用无菌水清洗1-2次，用滤纸吸干水分后放入体积浓度为70-75％酒精中浸泡0.5-1min，之后放入加有2-3d、0.1％吐温20的0.1％升汞溶液中处理10-15min，期间搅拌3-4次，最后用无菌水清洗3-4次。

4.根据权利要求3所述的甘蔗组织培养中外植体防褐化的方法，其特征在于，采用抗氧化剂浸泡时间为15-30min。

5.根据权利要求3所述的甘蔗组织培养中外植体防褐化的方法，其特征在于，所述抗氧化剂为聚乙烯吡咯烷酮、抗坏血酸、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、柠檬酸或磷酸丁脂中的一种。

6.根据权利要求1所述的甘蔗组织培养中外植体防褐化的方法，其特征在于，所述MS+6-BA培养基为：将1mg/L 6-BA加入到MS培养基中，调节pH至5.8，121℃下高压蒸汽灭菌20-25min即得。

7.根据权利要求1或6所述的甘蔗组织培养中外植体防褐化的方法，其特征在于，所述MS培养基为：硝酸钾1.9g/L，硝酸铵1.65g/L，七水合硫酸镁0.37g/L，磷酸二氢钾0.17g/L，氯化钙0.332g/L，四水合硫酸锰22.3mg/L，七水合硫酸锌8.6mg/L，硼酸6.2mg/L，碘化钾0.83mg/L，二水合钼酸钠0.25mg/L，五水合硫酸铜0.25mg/L，六水合氯化钴0.025mg/L，乙二胺四乙酸二钠3.73mg/L，七水合硫酸亚铁2.78mg/L，甘氨酸0.2mg/L，维生素B1 0.05mg/L，维生素B6 0.1mg/L，烟酸0.05mg/L，肌醇0.01g/L。

8.根据权利要求7所述的甘蔗组织培养中外植体防褐化的方法，其特征在于，所述6-BA为：6-苄基腺嘌呤1mg/L。

9.根据权利要求8所述的甘蔗组织培养中外植体防褐化的方法，其特征在于，所述培养的条件为：第1周为暗培养阶段：pH 5.8-6.0，光照强度0μmol/(m².s)，温度28-30℃，第2周为光培养阶段：pH5.8-6.0，光照强度100-120μmol/(m².s)，光照时间12h/天，温度28-30℃。