[发明专利]一种用于竹叶石蜡切片前的去硅预处理方法

说明书

本发明公开了一种用于竹叶石蜡切片前的去硅预处理方法，在竹叶采集后，先立即用70％FAA液中固定，再进行复水，然后采用氢氟酸进行去硅预处理，再进行脱水和常规石蜡制片法制片。本发明在竹叶石蜡制片前利用氢氟酸进行去硅预处理，操作简便，能够获得完整的竹叶显微结构。试验证实，在石蜡制片前，将竹叶置于25％氢氟酸中处理2d。可以获得高质量的竹叶内部结构图片。因此本发明是一种有效观察竹叶内部显微结构的技术，有效解决了竹类植物竹叶切片过程中易破碎的问题，为建立和丰富完善竹类植物竹叶石蜡制片方法奠定基础。

技术领域

本发明属于竹类植物显微结构观察技术领域，具体涉及一种通过控制氢氟酸浓度和浸泡时间进行竹类植物叶片石蜡切片前预处理，以获得竹叶片完整内部解剖结构的方法。

背景技术

竹林是我国重要的植被生态类群，它不仅具有很高的生态效益，而且有很高的经济效益和社会效益。竹林在世界范围内分布广泛，被称为“世界第二大森林”。中国是世界竹类资源最丰富的国家，有竹子40多属500多种，竹种资源、竹林面积和蓄积量均居世界前列。竹类植物是能够影响居民日常生活的、具有多目标功能的植物，在改善小气候环境[郑钧，吴仁武，史琰，等.竹类植物的主要环境效应研究进展[J].浙江农林大学学报.2017，34(2)：374-380]、水土保持、环境保护、旅游发展方面具有重要意义。此外，竹子形态多姿优美，四季常绿，观赏价值高，被广泛用于美化环境和风景园林业，为人们提供良好的旅游和休闲场所[李岚，朱霖，朱平.中国竹资源及竹产业发展现状分析[J].南方农业.2017，11(1)：6-9]。竹叶是进行光合作用[杨丽，娄永峰，彭镇华，等.毛竹、麻竹光合途径类型分析[J].南京林业大学学报(自然科学版).2015，39(5)：169-173]、蒸腾作用和合成有机物质的主要器官，其结构特点对于功能具有重要的影响。竹叶内部解剖结构的观察对竹子的分类[丁雨龙，赵奇僧，陈志银，等.竹叶结构的比较解剖及其对系统分类意义的评价[J].南京林业大学学报.1994，18(3)：1-6]和系统发育具有一定重要的意义[钱领元，方伟.国产16种竹叶的比较解剖研究[J].竹子研究汇刊.1986，5(2)：78-86]。

竹叶内部解剖结构一直被许多学者所研究[朱振贤，张芬耀，宋盛，等.竹亚科植物分类研究进展[J].世界林业研究.2017，30(3)：35-40]，陈晓亚[陈晓亚，胡成华.方竹属(竹亚科)叶片表皮微形态特征[J].植物分类学报.1993，31(3)：227-235]等利用扫描电镜和光镜研究了方竹属叶表皮微形态，发现下表皮特征尤其是乳突对竹类植物分类研究具有重要意义，由此得出的分类结果与广义的方竹属分类基本吻合；丁雨龙[丁雨龙.刚竹属(Phyllostachys)系统分类的研究[D].南京林业大学，1998]发现乳突、毛被多态性及粗毛的存在与否有利于部分刚竹属竹种的鉴别；杨赵平[杨赵平，杜凡，彭芸，等.镰序竹属与悬竹属叶的比较解剖[J].广西植物.2009，29(3)：304-308]等通过观察不同竹种间竹叶内部解剖结构，对不同竹种进行分类。

然而竹叶中含有硅细胞[Zhang C，Wang L，ZhangW，et al.Do lignification andsilicification of the cell wall precede silicon deposition in the silica cellof the rice (Oryza sativa L.)leaf epidermis？[J].Plant and Soil.2013，372(1-2)：137-149]使得竹叶坚硬粗糙，导致制片过程中切片易破碎，不能获得清晰完整的竹叶切片。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种观察叶片完整显微结构的方法，克服竹叶切片过程中易切碎，结构不完整等问题。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种用于竹叶石蜡切片前的去硅预处理方法，在竹叶采集后，先立即用70％FAA液中固定，再进行复水，然后采用氢氟酸进行去硅预处理，再进行脱水和常规石蜡制片法制片。