[发明专利]一种抗菌肽及其原核表达方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗菌肽及其原核表达方法和应用。本发明采用原核表达载体构建包含抗菌肽cecropin‑BM的编码基因的重组载体，实现了抗菌肽cecropin‑BM的原核表达，方法简单易行，获得的重组抗菌肽在纯化后不经任何处理即具有明显的体外抑菌效果。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，特别是涉及一种抗菌肽及其原核表达方法和应用。

背景技术

抗菌肽(antimicrobial peptide)是一种天然存在于几乎所有生物体中的小分子多肽，是生物体天然免疫的重要组成部分，不仅具有广谱抗菌作用，对一些真菌、寄生虫和部分有被膜的病毒也具有杀灭作用。与常规抗生素不同，抗菌肽不易引起细菌产生耐药性，且对抗生素耐菌株也具有杀灭作用，在新型抗菌药物开发领域显示出巨大的潜力。但是，天然抗生素也存在来源受限、效价较低、较长的多肽序列导致人工合成成本较高等不足。因此，开发和制备能够克服上述缺点的新一代抗菌肽具有重要意义。

天然抗菌肽大多为阳离子抗菌肽(电荷数在+2～+9之间)，并可形成稳定的α-螺旋结构。α-螺旋可位于肽链的N-端或C-端，具有水脂两亲性，是抗菌肽发挥抗菌活性的构象基础。一般认为，带正电荷的抗菌肽通过静电引力作用被吸附到带负电荷的细菌质膜表面，进而形成两亲性螺旋构象，这种构象有助于抗菌肽的疏水面插入细胞膜磷脂双分子层，从而破坏细菌质膜，起到杀菌作用。已有研究显示，在一定范围内提高抗菌肽的疏水性和净正电荷数可增强其杀菌活性，这是因为疏水性升高可增强抗菌肽的疏水基团插入细菌质膜的能力，而增加净电荷数可增强抗菌肽与细菌质膜的结合能力。此外，增强疏水性和净电荷数也更有利于提高α-螺旋的稳定性。

天蚕素A(cecropin A)是最早从昆虫中发现的一类阳离子抗菌肽，前体肽由61个氨基酸构成。Cathelicidins抗菌肽是哺乳动物内源性抗菌肽中最主要的一类阳离子抗菌肽，BMAP-27是Cathelicidins家族的代表，成熟肽由129个氨基酸残基构成。为获得抗菌活性强、肽链较短的新型抗菌肽，本发明以天然天蚕素A和BMAP-27为蓝本，在分析这两种肽的α-螺旋、净正电荷数、疏水性和两亲性等理化性质的基础上，设计了一条由32个氨基酸残基构成的阳离子抗菌肽，并建立了该新型抗菌肽的原核表达方法。抑菌试验结果表明该抗菌肽具有良好的抗菌活性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗菌肽及其原核表达方法和应用。本发明的抗菌肽是一种新型的阳离子抗菌肽，由32个氨基酸残基构成，且本发明的原核表达方法获得的重组抗菌肽在纯化后不经任何处理即具有明显的体外抑菌效果。

为了达到上述的目的，本发明采取以下技术方案：

一种抗菌肽cecropin-BM的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

优选地，对所述表达载体进行PCR扩增的引物序列为8条：

P1：CGCGGATCCATGAGCTATGGCCAGGGCCAGTTTTTTCGTGAAATTGAAAATCTGAAAGAATATTTCA；

P2：CCGCCTTTCGCCACATCCGGGCTGCTCGCGTTGAAATATTCTTTCAGATTTTCAATTTCA；

P3：GATGTGGCGAAAGGCGGTCCTCTGTTTAGCGAAATTCTGAAAAATTGGAAAGATGAAAGC；

P4：AAGCTCACAACTGGCTCTGAATAATCTTTTTATCGCTTTCATCTTTCCAATTTTTCAGA；

P5：CAGAGCCAGATTGTGAGCTTTTACTTCAAACTGTTTGAGAACTTGAAAGATGAGGAGTAA；

P6：CGCAAACACAAAGCTCAGAATACGCACAAATGTCATTACTCCTCATCTTTCAAGTTCTCA；