[发明专利]一种抗菌肽及其原核表达方法和应用有效
| 申请号： | 201811038571.9 | 申请日： | 2018-09-06 |
| 公开（公告）号： | CN109266655B | 公开（公告）日： | 2021-11-09 |
| 发明（设计）人： | 谭勋;邵冯金;应易恬 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C07K14/435;C12N15/70 |
| 代理公司： | 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 黎双华;李欣玮 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 抗菌 及其 表达 方法 应用 | ||
1.一种抗菌肽cecropin-BM的编码基因，其特征在于，该编码基因的核苷酸序列如SEQID No.1所示。
2.一种抗菌肽cecropin-BM的重组载体，其特征在于，该重组载体包含如SEQ ID No.1所示的cecropin-BM的编码基因。
3.一种抗菌肽cecropin-BM，其特征在于，所述抗菌肽cecropin-BM由如SEQ ID No.10所示的核苷酸序列编码。
4.一种抗菌肽cecropin-BM原核表达的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
获取抗菌肽cecropin-BM的编码基因；所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；
构建重组载体：将抗菌肽cecropin-BM的编码基因的PCR扩增产物连接到pMD19-T克隆载体中，构建得到重组质粒pMD19-IFN-cecropin-BM；分别酶切重组质粒pMD19-IFN-cecropin-BM和原核表达载体pET-28a(+)，构建得到包含cecropin-BM的编码基因的重组载体pET28-IFN-cecropin-BM；
表达抗菌肽cecropin-BM：将重组载体pET28-IFN-cecropin-BM转化至BL21菌株中，利用IPTG诱导后收集包含抗菌肽cecropin-BM的细菌。
5.根据权利要求4所述的一种抗菌肽cecropin-BM原核表达的方法，其特征在于，所述方法还包括：采用含脲和咪唑的PBS重悬液处理离心破碎后的细胞菌液，随后离心并收集沉淀，获得上清液；
采用Ni柱亲和层析法纯化所述上清液，获得纯化后的抗菌肽cecropin-BM。
6.根据权利要求3所述的抗菌肽cecropin-BM在制备抑制大肠杆菌和金黄葡萄球菌生长的制剂中的应用。
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