[发明专利]正常肝干细胞向肝癌干细胞恶性转化的诱导方法

说明书

本发明属于肝干细胞恶性转化技术领域，公开了一种正常肝干细胞向肝癌干细胞恶性转化的诱导方法，所述诱导方法包括在正常肝干细胞中同时失调四种转录因子联合诱导出肝癌干细胞的步骤；所述四种转录因子分别为TG737、miR10b、miR200a和CD44。本发明通过沉默TG737、过表达MiR‑10b、沉默miR‑200a和过表达CD44，实现了将正常肝干细胞向肝癌干细胞的恶性转化，从而利用本发明的诱导方法可以为肝癌的研究提供实验模型，利于肝癌疾病的研究。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种正常肝干细胞向肝癌干细胞恶性转化的诱导方法。

背景技术

肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma，HCC)是最常见的原发性肝癌类型，也是占全球癌症相关死亡原因的第三位。HCC是一个复杂、多步骤的过程与各种遗传因素改变的累积有关。HCC患者虽然可以经过手术切除、消融、化疗栓塞、索拉菲尼等方案治疗，但是由于肿瘤侵袭性高，肝内扩散及肝内转移频繁导致预后效果极差，5年内生存率低于5％。因此，提高对HCC复杂的分子机制的理解对于开发新的治疗策略至关重要。

肝干/祖细胞(liver stem/progenitor cells,LSPCs)具有很高的增殖潜能，可能是唯一能在积累一定突变后转化为启动HCC的细胞。LSPCs还可能维持这些突变并将它们传递给子代肝细胞，导致LSPCs的恶性转化为肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)，从而导致HCC启动。大多数癌症是通过基因中突变的积累来实现的，这些基因决定着细胞的增殖、细胞周期、细胞分化和侵袭。可以想象，改变调控细胞周期、细胞增殖、细胞分化和细胞侵袭的编码和非编码基因可能对LSPCs的恶性转化具有显著的影响。

有一小部分癌细胞构成了自我维持的细胞库，具有独特的自我更新和维持肿瘤增殖的能力，称为癌症干细胞(CSCs)。CSCs具有与相应正常干细胞相似的基因表达谱和与性质，同时在维持恶性肿瘤增殖、侵袭、转移和复发方面起着决定性作用。越来越多的科学研究表明，CSCs存在于各种人类肿瘤中包括HCC。此外，在某些病理过程中，CSCs可能来自正常干/祖细胞的恶性转化。

虽然HCC细胞的确切来源仍然未知，但是过去几年累积的数据表明，由LSCPs转化的LCSCs，很可能代表驱动癌症发展的细胞。因此，利用这种细胞做好相关研究有可能为开发更有效的癌症治疗开辟新的曙光，并可能为开发有效消灭癌症细胞提供机会。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种正常肝干细胞向肝癌干细胞恶性转化的诱导方法，具体地，涉及正常肝干细胞(WB-F344)向肝癌干细胞恶性转化的诱导方法。

WB-F344细胞系购买自中国科学院上海生命科学研究院生化细胞所细胞库。

本发明所采用的技术方案为：

一种正常肝干细胞向肝癌干细胞恶性转化的诱导方法，所述诱导方法包括在正常肝干细胞中同时失调四种转录因子联合诱导出肝癌干细胞的步骤；所述四种转录因子分别为TG737、miR10b、miR200a和CD44。

进一步的，四种转录因子的具体失调方式分别为沉默TG737、过表达MiR-10b、沉默miR-200a和过表达CD44。

进一步的，所述正常肝干细胞为WB-F344。

进一步的，所述诱导方法的具体步骤包括：

A、构建可诱导慢病毒载体系统，得到慢病毒载体；

A1、构建短发夹shRNA可诱导慢病毒载体系统，转录因子为TG737和miR200a，得到短发夹shRNA可诱导慢病毒载体；

A2、构建真核表达载体pcDNA3.1可诱导慢病毒载体系统，转录因子为miR10b和CD44，得到真核表达载体pcDNA3.1可诱导慢病毒载体；